[发明专利]一种蛋白曝光Marker制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学与基因工程领域，尤其是涉及一种蛋白曝光Marker的制备方法。

背景技术

蛋白分子量标准，常称之为蛋白Marker。在免疫印迹(Western blot)试验中，蛋白分子量Marker虽不起眼，但意义重大，是阳性对照，是大小的标准，是必须的。只有Marker精确无误了，实验结果才有说服力。除此之外，蛋白Marker还能够提示电泳是否正常，转移是否成功等信息。所以选择正确的蛋白Marker是western blot实验成功的必要条件之一。

现有的蛋白Marker经历了普通Marker、预染Marker和曝光Marker三个发展阶段。

其中，普通蛋白Marker，或称之为未染色蛋白分子量标准，也叫预混(pre mixed)蛋白分子量Marker，是最简单，也是最准确的一种，由于没有附带染料分子或者是标记分子，所示大小正好是蛋白原本的大小，是早期精确判断蛋白大小必备产品。普通Marker多数都选用预混和的Marker，方便不同大小的蛋白的比较。目前，普通Marker不如预染Marker好用，因为电泳过程中完全看不到，要和目标蛋白一起等到最后染色才能见真容，无法对实验过程起预示参照作用。完全属于“后知后觉”型的，当然还是比“不知不觉”不做对照的要好。

预染蛋白分子量(prestained Marker)，也叫预染Marker，是将Marker蛋白，通过与染料共价耦联，在电泳过程中或者转膜时可以肉眼直接观察到的一种蛋白分子量Marker。预染Marker带来了很多方便，可以帮助我们在电泳时、电泳后，以及转膜后监测电泳情况和估计迁移率。由于预染蛋白Marker与染料共价耦联，在不同的缓冲条件下电泳时迁移特性可能会发生某些变化，可能会导致一些偏差，所以不太适合精确定位蛋白。

普通Marker和预染Marker还有一个缺点就是不能够在最终Western曝光的胶片或者扫描照片中显色，最终判断Western结果，还需要将照片和膜进行比对，这样很容易导致实验结果出现偏差或者错误。曝光Marker(Exposure Marker)就是最终的Marker条带会和检测目标蛋白会一同出现在显色的图片中，避免将照片和膜进行比对时出现偏差。因此，研究和开发高质量的曝光Marker将会为科学实验的研究进展提供一定的辅助作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种蛋白曝光Marker的制备方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种蛋白曝光maker的制备方法，其特征在于：根据所需蛋白曝光marker分子量选择带有不同融合标签的表达载体，PCR扩增得到protein G基因，将protein G与所述带有不同融合标签的表达载体通过酶切酶连得到不同大小的protein G重组蛋白的表达载体，然后转化宿主细胞，诱导表达得到不同大小的protein G重组蛋白，最后经纯化得到不同分子量的蛋白曝光marker。

进一步地，所述的蛋白曝光maker分子量为10-120KD之间。

进一步地，所述带有不同融合标签的表达载体包括：pET28a、pET32a、pGEX 6P-1和pMAL-c2x。

进一步地，所述宿主细胞为大肠杆菌，优选为大肠杆菌BL21(DE3)。

进一步地，得到不同分子量的蛋白曝光marker后，通过SDS-PAGE检测蛋白分子量和纯度，并对蛋白进行定量储存。

按照上述制备方法制备的蛋白曝光maker的应用，需要根据蛋白曝光Marker所需条带大小，选择纯化后的相应大小蛋白进行混合、分装，即可作为曝光Marker的示踪蛋白。

本发明提供一种蛋白曝光Marker的制备方法，通过构建重组含protein G的不同大小融合标签表达载体，分别诱导表达、纯化后，根据需要选择不同大小的protein G重组蛋白，然后进行分离纯化、混合后制备出不同曝光Marker，批间重复性完全可以保障，保证了实验的精准性。

具体实施方式