[发明专利]海马的鉴定方法

权利要求书

1.海马的鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：

a、提取海马DNA；

b、PCR扩增：对海马DNA进行PCR扩增；

反应体系为：2X Taq master mix缓冲液12.5μL，引物终浓度0.8μM，待海马DNA 1μL；引物为上述四种引物中的至少一种，ddH₂O补足25μL；

反应程序为：94℃预变性1min，94℃变性30s，64℃退火30s，30个循环，反应结束后15℃保存；PCR反应设置无模板DNA的阴性对照；

c、PCR扩增结束后，在反应体系内加入1μL 100X SYBR Green I染料，在紫外灯下检测样品颜色；

若样品颜色不为黄色或黄绿色，则样品中不含有相应海马，鉴定结束；

若样品颜色为黄色或黄绿色，则样品中含有相应海马；取5μL PCR产物进行1.5％琼脂糖凝胶电泳检测，确定海马种类。

2.根据权利要求1所述的海马的鉴定方法，其特征在于：a步骤中提取海马DNA的方法采用下述快速提取法：

取海马药材约50mg，加入60～80μL提取试剂A，混匀后，100℃孵育30s,加入200μL中和试剂B，混匀后，9000rpm离心5min，取上清；

其中，所述提取试剂A为0.5M氢氧化钠、1％PVP 40、1％Triton X-100；中和试剂B为0.1M Tris-Hcl。

3.根据权利要求2所述的海马的鉴定方法，其特征在于：所述快速提取法通过煮沸法碱裂解快速提取。

4.根据权利要求1～3任一项所述的海马的鉴定方法，其特征在于：所述b步骤中PCR扩增的引物为日本海马鉴定用引物、三斑海马鉴定用引物、大海马鉴定用引物、管海马鉴定用引物中至少一种；当加入多种引物时，若样品颜色为黄色或黄绿色，则样品中至少含有一种引物所对应的海马；

其中，所述的日本海马鉴定用引物序列如Seq ID NO.1和Seq ID NO.2所示，所述的三斑海马鉴定用引物序列如Seq ID NO.3和Seq ID NO.4所示，所述的大海马鉴定用引物序列如Seq ID NO.5和Seq ID NO.6所示，所述的管海马鉴定用引物序列如Seq ID NO.7和Seq ID NO.8所示。