[发明专利]一种基于NPCo/Co3O4-Au/RuSi@Ru(bpy)32+构建的真菌毒素类和激素类电致化学发光传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种基于NPCo/Co₃O₄-Au/RuSi@Ru(bpy)₃²⁺构建的真菌毒素类和激素类电致化学发光传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将直径4 mm的玻碳电极依次用1.0 μm、0.3 μm、0.05 μm氧化铝抛光粉抛光处理，乙醇超声清洗，再用超纯水冲洗干净；

（2）滴涂6 μL、0.5~2 mg mL^-1的待测物抗体孵化物NPCo/Co₃O₄-Au/RuSi@Ru(bpy)₃²⁺/Ab溶液于电极表面，4℃保存至干燥；

（3）滴加4 μL、质量分数为1~3%的牛血清白蛋白溶液，以封闭电极表面的非特异性活性位点，用pH6.4~8.4的PBS溶液冲洗电极表面，4℃晾干，制得一种基于NPCo/Co₃O₄-Au/RuSi@Ru(bpy)₃²⁺构建的真菌毒素类和激素类电致化学发光传感器。

2.如权利要求1所述的一种基于NPCo/Co₃O₄-Au/RuSi@Ru(bpy)₃²⁺构建的真菌毒素类和激素类电致化学发光传感器的制备方法，所述待测物抗体孵化物NPCo/Co₃O₄-Au/RuSi@Ru(bpy)₃²⁺/Ab溶液，其特征在于，制备步骤如下：

（1）NPCo/Co₃O₄-Au的制备

将CoAl合金置入过量的0.5～1.5 mol/L的氢氧化钠溶液中，在室温下腐蚀32～74 h，离心洗涤至中性，在室温下干燥12～48 h，制得纳米多孔Co/Co₃O₄纳米材料，即NPCo/Co₃O₄；

将80～120 mL，质量分数为0.005～0.015%的氯金酸溶液煮沸，加入2～3 mL，质量分数为0.5～1.5%的柠檬酸三钠水溶液，加热回流10～20 min，溶液颜色变成酒红色，将溶液冷却至室温，得到金纳米粒子，4℃下避光保存；

将1～3 mg的NPCo/Co₃O₄分散到1 mL超纯水中，加入0.5～1.5 mL金纳米粒子，得到的混合溶液在室温下振荡12～32 h，离心分离，除去过量的金纳米粒子，制得NPCo/Co₃O₄-Au，将NPCo/Co₃O₄-Au重新分散到1 mL超纯水中，制得NPCo/Co₃O₄-Au溶液；

（2）RuSi@Ru(bpy)₃²⁺的制备

将330～350 μL、35～45 mmol/L Ru(bpy)₃²⁺和1.77 mL聚乙二醇辛基苯基醚、7.5 mL环己烷以及1.8 mL正己醇共混，混合液磁力搅拌25～35min，形成油包水微乳液，加入100 μL四乙基原硅酸钠和60 μL氨水，搅拌24 h，加入丙酮破坏微乳剂，离心并用乙醇和超纯水洗涤，得到橙色的RuSi NPs；加入体积分数为10%的氨丙基三乙氧基硅烷的乙醇溶液，搅拌2 h，得到氨基化的RuSi NPs，离心并重新分散到500 μL、pH 6.4～8.4的PBS溶液中，加入9～11 μL、质量分数为1%的Ru(bpy)₃²⁺和10 μL、质量分数为1%的羟基琥珀酰亚胺，磁力搅拌24 h，离心，用pH 6.4～8.4的PBS溶液洗涤所得的RuSi@Ru(bpy)₃²⁺，除去过量的Ru(bpy)₃²⁺和羟基琥珀酰亚胺，并重新分散到500 μL、pH 6.4～8.4PBS溶液中，制得RuSi@Ru(bpy)₃²⁺溶液；

（3）纳米复合物NPCo/Co₃O₄-Au/RuSi@Ru(bpy)₃²⁺溶液的制备

将80～120 μL的RuSi@Ru(bpy)₃²⁺溶液加入到（1）制得的NPCo/Co₃O₄-Au溶液中，室温下振荡12～32 h，离心，将得到的产物分散到pH6.4～8.4的PBS溶液中，制得纳米复合物NPCo/Co₃O₄-Au/RuSi@Ru(bpy)₃²⁺溶液；

待测物抗体孵化物NPCo/Co₃O₄-Au/RuSi@Ru(bpy)₃²⁺/Ab溶液的制备

在纳米复合物NPCo/Co₃O₄-Au/RuSi@Ru(bpy)₃²⁺溶液中，加入10～100μL、1 mg/mL的待测物抗体Ab溶液，在4℃下振荡孵化24 h，离心除去过量的待测物抗体Ab，将产物分散到1 mL、pH 7.4的PBS溶液中，制得待测物抗体孵化物NPCo/Co₃O₄-Au/RuSi@Ru(bpy)₃²⁺/Ab溶液，储存在4 ℃下备用。