[发明专利]一种合成特立帕肽的方法

权利要求书

1.一种合成特立帕肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、N端偶联有保护基的Phe在偶联试剂和活化试剂作用下和HMP Linker树脂进行酯化反应，得到肽树脂1，所述HMP Linker树脂为HMP Linker Amide树脂、HMP Linker BHA树脂或HMP Linker MBHA树脂；

步骤2、按照特立帕肽氨基酸序列C端到N端的顺序，从肽树脂1出发，在缩合试剂和活化试剂作用下，将其余保护氨基酸进行逐一延伸偶联，每次延伸偶联后均得到对应的肽树脂，最终获得特立帕肽树脂，然后酸解获得特立帕肽粗品，特立帕肽粗品纯化转醋酸盐得到特立帕肽纯品；

所述酸解采用由体积百分比为80-95％的TFA、体积百分比为1-10％的EDT、余量为水组成的混合酸解液酸解。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述N端偶联有保护基的Phe和HMP Linker树脂的摩尔比为1-6:1。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，每次延伸偶联时所述保护氨基酸和对应肽树脂的摩尔比为1-6:1。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述缩合试剂为N,N-二异丙基碳二亚胺、N,N-二环己基碳二亚胺，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷/有机碱、2-(7-氮杂-1H-苯并三氮唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯/有机碱、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐/有机碱、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯/有机碱中的一种。

5.根据权利要求4所述方法，其特征在于，所述有机碱为N,N-二异丙基乙胺、三乙胺或N-甲基吗啡啉。

6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述活化试剂为1-羟基苯并三唑或N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑。

7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述偶联试剂为N,N-二异丙基碳二亚胺/4-二甲氨基吡啶双体系偶联试剂。

8.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述纯化转醋酸盐步骤为：

特立帕肽粗品，加10％醋酸溶液溶解，溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，纯化备用；

采用高效液相色谱法进行纯化，纯化用色谱填料为10μm的反相C18，流动相系统为0.1％TFA/水溶液-0.1％TFA/乙腈溶液，77mm*250mm的色谱柱流速为90mL/min，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集主峰蒸去乙腈后，得特立帕肽纯化中间体浓缩液；

取特立帕肽纯化中间体浓缩液，用0.45μm滤膜滤过备用；

采用高效液相色谱法进行换盐，流动相系统为1％醋酸/水溶液-乙腈，纯化用色谱填料为10μm的反相C18，77mm*250mm的色谱柱流速为90mL/min，采用梯度洗脱，循环上样方法，上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，采集图谱，观测吸收度的变化，收集换盐主峰并用分析液相检测纯度，合并换盐主峰溶液，减压浓缩，得到特立帕肽醋酸水溶液，冷冻干燥，得特立帕肽纯品。