[发明专利]用于检测环境污染物DEHP的基因芯片及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于检测环境污染物DEHP的基因芯片，包括点制在玻片上的探针，其特征在于：所述的探针包括探针1、探针2和探针3，所述的探针1核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的探针2核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述的探针3核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.根据权利要求1所述的用于检测环境污染物DEHP的基因芯片，其特征在于：用于扩增探针1的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；用于扩增探针2的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；用于扩增探针3的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。

3.一种根据权利要求1所述的用于检测环境污染物DEHP的基因芯片的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

a、总RNA的提取：取蛤仔体腔液制备RNA提取液；

b、cDNA合成：取上述RNA提取液合成cDNA，具体合成方法依cDNA合成试剂盒说明书进行；

c、PCR扩增：50μL扩增体系：10×Buffer 10.0μL，终浓度200μM的dNTP mix 4.0μL，5U/μL的TqDNA聚合酶0.4μL，10μM的正反向引物各1μL，10～100ng的cDNA溶液1μL，ddH₂O补充至50.0μL；扩增反应条件：95℃5min；94℃45s，55～58℃45s，72℃45s，35个循环；后延伸72℃10min；d、探针制备：将50μL异丙醇加入到PCR扩增产物中混匀，-20℃放置30min，4℃，12000g离心5min，取DNA沉淀，然后加入100μL体积浓度为75％的乙醇水溶液洗一次，12000g离心5min，小心去掉上清，干燥，加10μL无菌水溶解，得到探针溶液；

e、芯片制备：取5μL探针溶液作为探针与5μL点样液混合，有序的点印在预制好的玻片上，设计阳性对照、阴性对照并以点样液为空白对照，即得到用于检测环境污染物DEHP的基因芯片。

4.根据权利要求3所述的用于检测环境污染物DEHP的基因芯片的制备方法， 其特征在于：所述的探针溶液中包括包括探针1、探针2和探针3，所述的探针1核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的探针2核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述的探针3核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

5.根据权利要求3或4所述的用于检测环境污染物DEHP的基因芯片的制备方法，其特征在于：所述的引物溶液中包括

用于扩增探针1的正向引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示：

5'-GGGACATATCCAATGGTGAC-3'，

用于扩增探针1的反向引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示

5'-GCCCTCTTGCGTTCTAGTTT-3'；

用于扩增探针2的正向引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示：

5'-TGCCCGTGCTTACTATTGAC-3'，

用于扩增探针2的反向引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示：

5'-CCTTTCTTCCTCGTTATCCT-3'；

用于扩增探针3的正向引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示：

5'-TGAGCGTTGAAGAAGGTTTG-3'，

用于扩增探针3的反向引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示：

5'-CGGTTTACCGCAGTCTATCC-3'。