[发明专利]一种软骨素酶的大规模生产方法

权利要求书

1.一种软骨素酶的大规模生产方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：

1)菌种活化：

将食砜节杆菌接种到种子培养基中进行扩大培养获得种子液；

2)种子罐发酵

将步骤1)制备的种子培养液按照体积比1.5％～2.5％的比例接种到20L种子罐的发酵培养基中进行发酵培养，获得种子培养液；发酵条件为：发酵温度为25～30℃，溶氧控制在20％～60％，搅拌转速为100rpm～150rpm，通气量开始为1～4L/min，随着溶氧降低到临近20％～60％时，以1L/min的梯度适时调整；

3)发酵罐发酵

将步骤2)的种子培养液按照体积比1.5％～2.5％的比例接种到500L生产罐的发酵培养基中进行发酵培养，发酵罐的装液量为50％～70％，发酵体系的溶氧：在发酵开始后的4～12h至发酵结束，溶氧控制在5％～30％。

2.如权利要求1所述软骨素酶大规模的生产方法，其特征在于，步骤2)种子罐发酵的发酵条件为：发酵温度为27～29℃，溶氧40％～50％，搅拌转速为100rpm～125rpm；通气量开始为2～3L/min，随着溶氧降低到临近40％～50％时，以1L/min的梯度适时调整。

3.如权利要求1所述软骨素酶大规模的生产方法，其特征在于，步骤3)所述的生产罐种子培养液的转接时间为种子罐发酵的8～16h内，在菌体生长的对数期末期。

4.如权利要求1所述软骨素酶大规模的生产方法，其特征在于，步骤3)所述的生产罐发酵温度：在发酵开始至发酵的4～14h内为25～30℃，4～13h至发酵结束，温度调低为25～27℃。

5.如权利要求4所述软骨素酶大规模的生产方法，其特征在于，步骤3)所述的生产罐发酵温度：在发酵开始至发酵的4～14h内为27～29℃，4～13h至发酵结束，温度调低为26～27℃。

6.如权利要求1所述软骨素酶大规模的生产方法，其特征在于，步骤3)所述的发酵体系的溶氧：在发酵开始后的前4～12h，溶氧控制在20％～60％；其中相关参数搅拌转速为100rpm～150rpm，通气量开始为25～50L/min，随着溶氧降低到临近20％～60％时，以10L/min的梯度适时调整。

7.如权利要求6所述软骨素酶大规模的生产方法，其特征在于，步骤3)所述的发酵体系的溶氧：在发酵开始后的前4～12h，溶氧控制在40％～50％；其中相关参数搅拌转速为100rpm～125rpm，通气量开始为30～40L/min随着溶氧降低到临近40％～50％时，以10L/min的梯度适时调整。

8.如权利要求1所述软骨素酶大规模的生产方法，其特征在于，步骤3)所述的11.如权利要求9所述软骨素酶大规模的生产方法，其特征在于，步骤(3)所述的发酵体系的溶氧：在发酵开始后的4～12h至发酵结束，溶氧控制在10％～20％。

9.如权利要求1所述软骨素酶大规模的生产方法，其特征在于，步骤3)所述的发酵体系的补料：在发酵开始后的4～14h至发酵结束要进行补料，补料方法为：

以补料培养基中的软骨素浓度计算，将培养基配制浓度为25％的溶液，按补料液与发酵体系的体积比为1：100～1:300向所述的发酵体系中添加补料液；

补料的方式为定时补料，每隔2h添加补料培养基一次，直至发酵结束；

补料培养基的组成为：硫酸软骨素钠90％～100％，酵母浸粉0～10％。

10.权利要求9所述软骨素酶大规模的生产方法，其特征在于，步骤3)所述的发酵体系的补料：补料时间须在发酵温度降低调节后的1～4h，优选2～3h。