[发明专利]一种合成西那普肽的方法

权利要求书

1.一种合成西那普肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、将保护的Lys与树脂偶联，获得在Lys的N端及其侧链上偶联有保护基、在其C端偶联有树脂的肽树脂1；

步骤2、将在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列N端偶联有保护基的多肽片段1的C端与肽树脂1的N端进行偶联，而后将保护的Lys再与片段1的N端偶联，获得在SEQ ID NO:2所示氨基酸序列N端、Lys侧链上偶联有保护基，在C端偶联有树脂的肽树脂2；

步骤3、将在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列N端偶联有保护基的多肽片段1的C端与肽树脂2的N端进行偶联，而后将保护的Lys再与片段1的N端偶联，获得在SEQ ID NO:3所示氨基酸序列N端、Lys侧链上偶联有保护基，在C端偶联有树脂的肽树脂3；

步骤4、将在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列N端偶联有保护基的多肽片段1的C端与肽树脂3的N端进行偶联，而后将保护的Lys再与片段1的N端偶联，获得在SEQ ID NO:4所示氨基酸序列N端、Lys侧链上偶联有保护基，在C端偶联有树脂的肽树脂4；

步骤5、将在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列N端偶联有保护基的多肽片段1的C端与肽树脂4的N端进行偶联，而后将保护的Lys再与片段1的N端偶联，获得在SEQ ID NO:5所示氨基酸序列N端、Lys侧链上偶联有保护基，在C端偶联有树脂的西那普肽树脂；

步骤6、西那普肽树脂酸解脱除C端树脂和所有保护基得到西那普肽粗品，粗品纯化转醋酸盐，获得西那普肽成品，所述酸解采用由体积百分比为80-95％的TFA、体积百分比为1-10％的EDT、余量为水组成的混合酸解液酸解。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述保护的Lys为在其N端和侧链偶联有保护基的Lys。

3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述保护的Lys为在其N端偶联有Fmoc保护基、在其侧链偶联有Boc保护基的Lys，即Fmoc-Lys(Boc)-OH。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1所述偶联采用偶联试剂偶联，所述偶联试剂为N,N-二异丙基乙胺、N,N-二异丙基碳二亚胺/1-羟基苯并三唑/4-N,N-二甲基吡啶两种之一。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述树脂为Trityl-Cl类树脂或羟基类树脂。

6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤2至步骤5所述偶联均采用缩合试剂和活化试剂偶联，所述缩合试剂为N,N-二异丙基碳二亚胺、N,N-二环己基碳二亚胺，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷/有机碱、2-(7-氮杂-1H-苯并三氮唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯/有机碱、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐/有机碱、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯/有机碱中的一种；所述活化试剂为1-羟基苯并三唑或N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑。

7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤6所述粗品纯化转醋酸盐具体为：

西那普肽粗品溶解后采用高效液相色谱法进行纯化，获得西那普肽纯化中间体浓缩液，然后以流动相系统为1％醋酸/水溶液-乙腈，以高效液相色谱法进行转醋酸盐。

8.根据权利要求7所述方法，其特征在于，步骤6所述粗品纯化转醋酸盐具体为：

西那普肽粗品，用水溶解，溶液用0.45μm混合微孔滤膜过滤，纯化备用；

采用高效液相色谱法进行纯化，纯化用色谱填料为10μm的反相C18，流动相系统为0.1％TFA/水溶液-0.1％TFA/乙腈溶液，77mm*250mm的色谱柱流速为90mL/min，采用梯度系统洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集主峰蒸去乙腈后，得西那普肽纯化中间体浓缩液；

取西那普肽纯化中间体浓缩液，用0.45μm滤膜滤过备用；

采用高效液相色谱法进行换盐，流动相系统为1％醋酸/水溶液-乙腈，纯化用色谱填料为10μm的反相C18，77mm*250mm的色谱柱流速为90mL/min；采用梯度洗脱，循环上样方法，上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，采集图谱，观测吸收度的变化，收集换盐主峰并用分析液相检测纯度，合并换盐主峰溶液，减压浓缩，得到西那普肽醋酸水溶液，冷冻干燥，得西那普肽成品。