[发明专利]同位素标记丹磺酰氯-13C2的合成方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种同位素标记丹磺酰氯-13C2的合成方法。

背景技术

液相色谱与质谱联用（LC / MS）已成为代谢研究中一个非常重要的工具。一个理想的LC / MS平台将识别并量化存在于生物样品中的所有代谢物，如细胞提取物和生物体液。但不幸的是，由于在代谢物的化学物理性质的巨大差异，一次性检测所有的代谢物是非常具有挑战性的。

一种用来解决这种多样性问题的策略是可根据疏水性，化学结构，或其它属性的不同将代谢组分成若干组，然后使用几种量身定做的优化的LC / MS方法来对每组代谢物进行分析。

然而我们还可以根据代谢产物含有一定的化学官能团，寻找一种选择性标记代谢产物的分析策略，在LC/MS鉴定和定量分析代谢产物中，胺和酚是代谢产物主要群体。复杂生物样品中含有的胺和酚的代谢物的定量描述是代谢生物学研究和疾病的生物标志物的非常重要的发现。和常规的已经进行多年氨基酸一样，生物胺和酚羟基经过柱前衍生即可通过薄层色谱（TLC）或HPLC进行分离，随后通过荧光或UV检测即可定量。

丹磺酰氯是一种简单的、稳定的化合物，丹磺酰氯也被用于和目标分析物形成衍生物，随后通过LC / MS分析，用于大多数代谢产物进行研究。

目前现有的报道方法为：

路线一，如Horner(Horner, L.; Lindel, H. Phosphorus, Sulfur Silicon Relat. Elem. 1983, 15, 1–8)和 Bergmann(Bergmann, F.; Pfleiderer, W. Helv. Chim. Acta 1994, 77, 203–215)描述的使用硫酸二甲酯-13C2滴加到劳伦酸的碳酸氢钠水溶液反应得到丹磺酸-13C2，经过干燥后再进一步和五氯化磷120摄氏度反应得到丹磺酰氯-13C2，该方法中用丹磺酸-13C2和五氯化磷固相反应，在投料量很小的时候无法混合均匀，导致副反应增加，收率急剧下降。

路线二，如中国专利CN201210431650描述，该专利描述的为一种普通的丹磺酰氯的合成，

路线二的收率为75%，是一个可以接受的收率，但是此方法是用了大量的三氯氧磷，三氯氧磷为剧毒品，对环境影响很大，并且在反应结束后的淬灭过程中需要消耗大量的碳酸氢钠，产生大量的气体，容易造成冲料。

发明内容

针对上述缺点，本发明的目的在于提供一种操作安全、方便的及收率比较高的同位素标记丹磺酰氯-13C2的合成方法。

本发明的技术内容为：一种同位素标记丹磺酰氯-13C2的合成方法，其特征为将丹磺酸-13C2溶解到无水二氯甲烷或者无水四氢呋喃溶剂中，丹磺酸-13C2与无水溶剂的重量体积比（g:ml）为1:30～1:50；氮气保护下冷却到0摄氏度，滴加无水N，N-二甲基甲酰胺，丹磺酸-13C2与无水N，N-二甲基甲酰胺的摩尔比为1:8～1:15，然后搅拌5～15分钟，继续滴加氯代试剂, 氯代试剂为二氯亚砜或者草酰氯，丹磺酸-13C2与氯代试剂的摩尔比为1:10～1:15，滴加毕后加热30～70度反应2～5小时，反应结束后，将溶液冷却到室温，减压蒸馏除去溶剂和氯代试剂，剩余物搅拌下加入冰水，丹磺酸-13C2与冰水的重量体积比（g:ml）为1:15～1:25；再加碳酸氢钠调pH值到5～7，再用二氯甲烷或者乙醚萃取有机相2～3次，合并有机相，丹磺酸-13C2与每次萃取用的二氯甲烷或者乙醚的重量体积比（g:ml）为1:15～1:25；再依次用水洗和饱和食盐水洗涤，丹磺酸-13C2与洗涤用的水的重量体积比（g:ml）为1:5～1:15，丹磺酸-13C2与饱和食盐水的重量体积比（g:ml）为1:5～1:15；有机相用无水硫酸镁干燥，丹磺酸-13C2与无水硫酸镁的质量比（g:g）为1:2~1:5，然后过滤浓缩干得到同位素标记丹磺酰氯-13C2粗产品。

在上述一种同位素标记丹磺酰氯-13C2的合成方法中制得的同位素标记丹磺酰氯-13C2粗产品进行提纯的方法为，同位素标记丹磺酰氯-13C2粗产品用300~500目硅胶层析柱分离，丹磺酰氯-13C2粗产品和硅胶的重量比为1:20~1:50，再使用石油醚与乙酸乙酯的混合溶剂冲淋，冲淋过程采用TLC检测流出液，待检测流出液中无同位素标记丹磺酰氯-13C2即冲淋完毕，然后合并流出液浓缩得到同位素标记丹磺酰氯-13C2；石油醚与乙酸乙酯的体积比为8：1~12：1。