[发明专利]一种大豆抗原β-conglycinin的检测方法

权利要求书

1.一种大豆抗原β-conglycinin的检测方法，所述检测方法为直接ELISA检测方法，其特征在于，步骤为：

1)包被样品：用包被缓冲液稀释成浓度为20ng/ml～640ng/ml的β-conglycinin，同时做空白孔和阴性对照孔，在底板的反应孔中加100μl，4℃过夜，次日，弃去孔内溶液，用洗涤液洗涤ELISA反应板3-5次，每次3min～5min；

2)封闭：每孔加入封闭液于37℃封闭1h，同上洗涤三次；

3)加样：加入不同浓度的β-conglycinin多克隆抗体与相应的抗原结合，每孔100μl，置37℃孵育1h，然后洗涤；

4)加酶标二抗：将酶标二抗用抗体稀释液稀释5000倍，取100μl加入不同反应孔中，37℃孵育1h，洗涤；

5)加底物液显色：于各反应孔中加入配制好的TMB底物溶液100μl，37℃反应15min～25min；

6)终止反应：加2M硫酸，每孔50ul，终止ELISA显色反应；

7)读取OD值：在酶标仪上，于492nm处，测各孔OD值，以阳性对照约为1.0，阴照小于0.1，且阳性/阴性(P/N)≥2的条件作最适条件，据此选择包被抗原和一抗体的工作浓度。

2.根据权利要求1所述大豆抗原β-conglycinin的检测方法，其特征在于，所述直接ELISA检测方法是将大豆抗原β-conglycinin兔多克隆抗体作为一抗，将羊抗兔作为酶标二抗，将TMB作为底物进行直接ELISA检测法，以定量检测大豆溶液中β-conglycinin的含量。

3.根据权利要求1所述大豆抗原β-conglycinin的检测方法，其特征在于，所述大豆抗原β-conglycinin的直接ELISA检测法标准曲线的确立，步骤为：将β-conglycinin稀释到浓度为20ng/ml、40ng/ml、80ng/ml、160ng/ml、320ng/ml、640ng/ml，测定OD492nm值，做出β-conglycinin浓度与吸光度二者关系的标准曲线，y＝0.028x+0.1821，其中R²＝0.9909，并且经过多次检测，标准曲线R²值均大于0.99。

4.根据权利要求1所述大豆抗原β-conglycinin的检测方法，其特征在于，所述显色底物由20mg邻苯二胺、25.7ml0.2M磷酸氢钠十二水、24.3ml0.1M柠檬酸、75ul30％H₂O₂配制而成。