[发明专利]Hsa‑miR‑3200‑5p在制备早期筛查或诊断Brachyury阳性肿瘤试剂或试剂盒中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及医学生物检测技术领域，是microRNAs在制备早期筛查或诊断Brachyury阳性肿瘤试剂或试剂盒中的应用。

背景技术

肺癌是目前全球死亡率最高的恶性肿瘤。美国每年大约有17万人死于肺癌，占整体癌症死亡人数的30％。随着经济的快速发展和空气污染的日益加重，我国的肺癌发病率也呈现逐年上升的趋势，已经成为我国城市人口癌症死亡的首要原因。据统计，肺癌患者的五年生存率仅为5-15％，其主要原因在于难于早期发现，大部分患者就诊时已经发生了不同程度的转移。如死于肺癌的患者的尸检中，有90％左右都会出现脊柱转移病灶，肺癌的转移成为患者生存期短预后差的重要原因，且转移病灶的巨大疼痛也使得患者的生存质量严重下降，加速了患者的死亡进程。虽然国际上对于肺癌转移的治疗已由原先的消极对症转为以外科手术为主辅以化疗、放疗、靶向治疗等多学科协作的综合性模式，患者的生存期和生存质量在一定程度上得到了提高，但由于缺乏简便有效的早期筛查方法以及对肺癌发生和转移机制认知不足、治疗方式的局限，肺癌仍然是造成患者死亡率居高不下的重要原因。目前国际上对于肺癌高危人群的筛查主要应用低剂量CT扫描，但由于相对较高的成本和辐射制约了其在临床上的广泛应用。基于以上原因，早期发现与肿瘤发生和转移进程相关的分子诊断标记物便可以为肿瘤治疗赢取一定的时间，成为控制肿瘤发展的重要途径。为了达到这一目的，首先要找出相较于正常体细胞，在肺癌中发生特异性表达改变并与转移等多种肿瘤发展进程密切相关的肿瘤“靶点”，即找到与肝细胞中著名的甲胎蛋白(AFP)有相似点的肿瘤标记物。

“肿瘤靶标”这一概念早已被广泛认可并进行了大量的研究，这一概念的核心是找到仅在肿瘤中特异性表达而在正常组织中不表达或局限性表达的分子，通过“生物导弹”直击肿瘤，对正常组织造成最小化的破坏。这一概念的出现和随之进行的大量研究正逐渐使肿瘤独有的特征具现化，并有可能最终“无所遁形”，也使得人类在与肿瘤的斗争中掌握了一定的主动权。对肿瘤的早期发现和有效治疗都有重大意义。

TATA-box转录因子Brachyury是T-box转录因子家族的成员之一，其同源体在诸多多细胞生物体内表达，如秀丽线虫、非洲爪蛙、老鼠、人类等胚胎中表达(参见文献Papaioannou VE,Silver LM,et al.The T-box gene family.Bioessays 1998；20:9-19.Kispert A,Herrmann BG,et al.Homologs of the mouse Brachyury gene are involved in the specification of posterior terminal structures in Drosophila,Tribolium,and Locusta.Genes Dev 1994；8:2137-50.Herrmann BG,Labeit S,et al.Cloning of theTgene required in mesoderm formation in the mouse.Nature 1990；343:617-22)。T-box蛋白主要在中胚层的形成和分化中具有重要作用，在胚胎发育晚期则在大部分组织中关闭表达仅集中于脊索区表达，并在脊柱形成后随着脊索的退化消失而在大多数正常成人组织中不表达，仅在睾丸中有表达、脾和小肠中有低水平表达的限制性表达方式(参见文献Duane H.Hamilton,Ph.D.,Postdoctoral Fellow,et al.Cancer vaccines targeting the epithelial-mesenchymal transition:tissue distribution of Brachyury and other drivers of the mesenchymal-like phenotype of carcinomas.Semin Oncol.2012Jun；39(3):358-66.)。然而，在已知的人类多种肿瘤组织和细胞系中，Brachyury却呈现出高水平的表达，这些肿瘤组织和肿瘤细胞系是：小肠、胃、肾、膀胱、子宫、卵巢、睾丸、脑和淋巴组织，肺组织、结肠组织和前列腺组织来源的细胞系(参见文献Palena C,Polev DE,et al.The human T-box mesodermal transcription factor Brachyury is a candidate target for T-cell-mediated cancer immunotherapy.Clin Cancer Res.2007 Apr 15；13(8):2471-8.Park JC,Chae YK,et al.Epigenetic silencing of human T(brachyury homologue)gene in non-small-cell lung cancer.Biochem Biophys Res Commun.2008 Jan 11；365(2):221-6.)。以上研究结果都提示了Brachyury可以应用于多种来源的肿瘤诊断和治疗中。然而，如何应用肿瘤组织中高表达的Brachyury对人群进行早期无创性的肿瘤筛查或进行临床诊断却没有具体有效的方法和研究。作为转录因子，Brachyury具有强大的启动或抑制下游基因转录的作用，因此，通过检测其下游被调控的某些易检测分子如外分泌蛋白质或miRNA的表达量便可以作为Brachyury表达水平的指标。