[发明专利]高效液相色谱串联质谱技术检测血清中10种类固醇激素的方法

说明书

技术领域

本发明属于血液检测技术领域，具体涉及高效液相色谱串联质谱技术检测血清中10种类固醇激素的方法。

背景技术

类固醇激素是一类脂溶性小分子激素，是由胆固醇经一系列酶催化而来。本发明主要针对其中对人体生长发育、性成熟及新陈代谢所必须的10种类固醇激素进行分析，包括脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)、睾酮(testosterone，T)、双氢睾酮(dihydrotestosterone,DHT)、雄烯二酮(androstenedione,AD)、雌酮(estrone,E1)、皮质酮(corticosterone,CORT)、孕酮(progesterone,P4)、孕烯醇酮(pregnenolone,P5)、17α-羟孕酮(17α-Hydroxyprogesterone,17α-OHP4)和17-羟孕烯醇酮(17-hydroxylpregnenolone,17-OHP5)。

其中，DHEA是一种非常重要的荷尔蒙，可使人改善记忆力，恢复性能力，降低血液中的胆固醇，并能抵抗肥胖、心脏疾病与压力，还能强化免疫系统。脱氢表雄酮过低可能引起糖尿病、免疫力不足、癌症、高血压及心脏病等重大疾病。17α-OHP4和CORT增高可能引起先天性肾上腺皮质增生，肾上腺腺瘤或卵巢肿瘤。T可增进记忆力、增加肌肉强度、减少脂肪、增加骨头硬度。DHT的作用主要是维持产生精子作用，刺激生殖器官的发育，维持正常的性欲，同时还能促进骨骼生长与钙磷的沉积和红细胞的生成。AD升高可引起痤疮，先天性肾上腺皮质增生，肾上腺皮质肿瘤等；AD降低可使得男性发育延迟，侏儒症，肾上腺皮质功能减退症，镰状红细胞性贫血。

总之，人体类固醇激素的升高或者降低与一些临床疾病如先天性肾上腺增生、多囊卵巢综合症、肾上腺皮质功能不全等疾病息息相关，其在血清中含量的高低对于评估人体健康是至关重要的。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种高效液相色谱串联质谱技术检测血清中10种类固醇激素的方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

高效液相色谱串联质谱技术检测血清中10种类固醇激素的方法，

所述的10种类固醇激素分别为：脱氢表雄酮、睾酮、双氢睾酮、雄烯二酮、雌酮、皮质酮、孕酮、孕烯醇酮、17α-羟孕酮和17-羟孕烯醇酮；

采用高效液相色谱串联质谱技术检测经过预处理的血清中的上述10种类固醇激素，先利用高效液相色谱将10种类固醇激素分离，再利用质谱同位素内标定量法，以标准品与内标物的浓度比为X轴，标准品与内标物的峰面积比为Y轴，建立校准曲线，计算上述10种类固醇激素的含量，具体色谱条件为：

(1)高效液相色谱条件：

流动相A：0.1％v/v甲酸水溶液；

流动相B：0.1％v/v甲酸的甲醇溶液；

色谱柱型号：Phenomenex C18100mm×2.1mm，2.6μm；

采用梯度洗脱的方式，见表1；

流速为0.5mL/min，柱温为35℃，进样体积为20μL；

表1 流动相梯度洗脱参数

(2)质谱条件： 

在电喷雾电离正离子检测模式下，采用多反应监测的质谱扫描模式；喷雾电压为5500V；碰撞气为Medium；气帘气为40kPa；离子源雾化气和加热辅助气均为60kPa；去溶剂温度为550℃；同时监测了目标物孕酮(m/z 345.093→124.1)、孕烯醇酮(m/z332.0→86.2)、17α-羟孕酮(m/z 361.0→112.2)、17-羟孕烯醇酮(m/z 348.0→330.3)、雄烯二酮(m/z 317.0→112.2)、脱氢表雄酮(m/z 304.2→253.2)、睾酮(m/z 304.1/112.2)、 双氢睾酮(m/z 306.2→81.1)、皮质酮(m/z 410.0→377.2)和雌酮(m/z 286.0→253.0)以及同位素内标d2-雌酮(m/z 288.0→255.1)、d6-脱氢表雄酮(m/z 310.3→219.2)、d8-17α-羟孕酮(m/z 269.2→115.1)和d3-睾酮(m/z 307.0→112.2)；各个目标物的去簇电压、碰撞电压和碰撞池出口电压参数见表2；

表2 10种类固醇激素质谱参数

其中，所述的血清为人或动物的血清。