[发明专利]一种检测样本中氧化低密度脂蛋白浓度的试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于体外免疫检测技术领域，具体涉及一种检测样本中氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)浓度的试剂盒及其制备方法。

背景技术

脂蛋白是血浆胆固醇和甘油三酯的主要载体；低密度脂蛋白(LDL)是一种密度较低(1.019～1.063g/cm³)的血浆脂蛋白，由磷脂，载脂蛋白(ApO)B多肽链，胆固醇，甘油三酯，碳水化合物等组成，约含25％蛋白质与49％胆固醇及胆固醇酯；氧化低密度脂蛋白(OxLDL)是天然的低密度脂蛋白(LDL)经氧化修饰形成的脂蛋白。

近年来人们发现OxLDL与动脉粥样硬化有密切的关系。Ox-LDL促使泡沫细胞的形成，而泡沫细胞的死亡将导致脂类在动脉壁的沉积，这是导致动脉粥样硬化的主要病因之一。最近研究表明，在动脉粥样硬化病灶中发现了OxLDL沉积，在正常动脉壁中没有，此属于动脉粥样硬化病灶的特有成分，因此，患者体内的OxLDL量远高于正常人，其浓度与病变范围呈比例。临床认为健康人体内Ox-LDL的含量为200-500μg/L，而当临床检测OxLDL含量大于600μg/L时为异常。因此Ox-LDL的检测对动脉粥样硬化心血管病的预警及早期辅助诊断具有重要意义。

目前，在市面上检测OxLDL浓度常用的试剂种类少，检测成本高，操作繁琐，对实验操作人员的技能要求高，不利于该项目检测的大范围推广。

发明内容

针对上述技术的不足之处，本发明提供一种操作简便、便于实验人员掌握、涉及实验仪器单一、普及率高、检测成本低、检测结果准确，非常利于大范围推广的氧化低密度脂蛋白(OxLDL)定量检测试剂盒。

一种检测样本中氧化低密度脂蛋白浓度的试剂盒，包括包被有抗氧化低密度脂蛋白克隆抗体的平台载体、不同浓度氧化低密度脂蛋白浓度梯度标准品、氧化低密度脂蛋白质控品、生物素标记的氧化低密度脂蛋白克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的亲和素、样本缓冲液、底物A、底物B、终止液、浓缩洗液。

进一步的，所述平台载体为微孔板，所述微孔板为96孔聚苯乙烯微孔板；所述抗氧化低密度脂蛋白克隆抗体为抗氧化低密度脂蛋白单克隆抗体；所述氧化低密度脂蛋白克隆抗体为氧化低密度脂蛋白单克隆抗体；所述底物A为过氧化氢的柠檬酸盐缓冲液；所述底物B为四甲基联苯胺的柠檬酸盐缓冲液；所述终止液为硫酸溶液；所述浓缩洗液为含有表面活性剂的磷酸盐缓冲液。

进一步的，所述试剂盒微孔板上抗氧化低密度脂蛋白单克隆抗体的数量为1-50μg/孔；氧化低密度脂蛋白浓度梯度标准品为6支、各2ml；所述氧化低密度脂蛋白质控品为2支各2ml；生物素标记的氧化低密度脂蛋白单克隆抗体10ml、1支；辣根过氧化物酶标记的亲和素10ml、1支；样本缓冲液10ml、1支；过氧化氢的柠檬酸盐缓冲液10ml、1支；四甲基联苯胺的柠檬酸盐缓冲液10ml、1支；硫酸溶液10ml、1支；含有表面活性剂的磷酸盐缓冲液10ml、1支。

进一步的，所述氧化低密度脂蛋白浓度梯度标准品和质控品都是用氧化低密度脂蛋白纯品与标准品稀释液按照1:200000-1:1000稀释而成，所述标准品不少于2个，所述质控品和所述标准品的区别只是浓度不同，所述质控品的作用是在试剂盒使用过程中起到核准校对的作用，即通过质控品测值是否在质控范围内来对标准品拟合出来的曲线进行核准校对，若质控品测值合格，则可以利用标准曲线来拟合出样本中的氧化低密度脂蛋白浓度值。

进一步的，所述的标准品稀释液，是在pH 7.0-8.0、浓度为10-100mM磷酸盐缓冲液中，分别加入1-10％质量分数的动物血清、0.01-0.5％质量分数的防腐剂、1-10％质量分数的蛋白保护剂、0.05-1％质量分数的表面活性剂混合而成。

进一步的，所述样本缓冲液是在pH6.0-7.0、浓度为10-100mM的磷酸盐缓冲液中，分别加入0.1-3mM的金属离子络合剂、1-10％质量分数的蛋白保护剂、0.01-1％质量分数的表面活性剂、0.01-0.5％质量分数的防腐剂混合而成；所述底物A是将过氧化氢纯品加入到浓度为50-100mM柠檬酸盐缓冲液中配制而成；所述底物B是将四甲基联苯胺加入到浓度为50-100mM柠檬酸盐缓冲液中配制而成；所述浓缩洗液是把质量分数为0.05-1％的表面活性剂加到pH6.0-7.0、浓度为10-100mM磷酸盐缓冲液中配制而成。

进一步的，所述的表面活性剂为曲达通X-100、吐温20(Tween 20)、布里杰-35(BRIJ-35)、吐温40、十二烷基磺酸钠、聚乙二醇2000；所述的防腐剂为PrOclin 300。