[发明专利]一种从盐渍萝卜中制备松脂素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及活性药物的技术领域，尤其涉及一种从盐渍萝卜中制备松脂素的方法。

背景技术

松脂素属于一种木脂素类化合物，人们常用来治疗甲状腺疾病、发烧的药用植物露兜树以及抗炎症的连翘属植物中都存在有松脂素。松脂素具有很好的抗真菌活性，可以在不引起人体红细胞溶血的同时破坏真菌的质粒膜而起到抗菌作用，是一种治疗人体真菌感染的潜在抗菌剂。在众多的木脂素类化合物种，松脂素在小肠内被吸收代谢后，可表现出最强的炎症活性。除此之外，松脂素还可以通过抑制低密度脂蛋白的氧化，对心血管类疾病如动脉粥样硬化起到预防作用。

Milder等曾对荷兰的植物性食物中包括松脂素在内的四种木脂素含量进行了调查，其中芸薹属蔬菜包括羽衣甘蓝、花椰菜、包心菜、球芽甘蓝、红叶卷心菜、白菜花以及德国泡菜中都含有数量不等的松脂素以及落叶松脂醇两种主要的木脂素，其中羽衣甘蓝的含量最高。Landet等对植物以及哺乳动物来源的松脂素进行了总结，发现，除蔬菜之外，一些油料种子如芝麻籽、葵花籽等，谷物如黑麦、小麦、燕麦和玉米等，水果如杏、山竹、草莓、柚子、红枣等，酒精饮料如啤酒、白酒、红酒等以及非酒精饮料如红茶、绿茶、豆奶等都存在数量不等的松脂素，但在萝卜及其腌制品中鲜有报道松脂素的存在。

有鉴于此，本发明人研究和设计了一种从盐渍萝卜中制备松脂素的方法，本案由此产生。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从盐渍萝卜中制备松脂素的方法，通过在盐渍萝卜中加入抽提液逐步抽提后，并通过反相硅胶柱及正相硅胶柱的色谱分离，最终制得松脂素，本发明首次从盐渍萝卜中分离到了松脂素，该成分是盐渍萝卜中抑制真菌的主要活性物质。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题的技术方案是：

一种从盐渍萝卜中制备松脂素的方法，包括以下步骤：

步骤一、盐渍萝卜干粉的制备：将盐渍萝卜切成薄片，于50℃下烘干，粉碎，过20目筛，得盐渍萝卜干粉，装于密封袋中，干燥器中保存备用；

步骤二、盐渍萝卜粗提物的制备：称取已烘干粉碎的5年盐渍萝卜粉2份，每份20g，分别置于2个500mL三角瓶中，按料液比1:15分别加入乙酸乙酯和丙酮，封口后置于摇床中，40℃，150rpm下提取6h，抽滤，收集滤液；再向残渣中加入相应溶剂进行第二次提取，在同样的条件下提取3h，抽滤，收集滤液，待残渣中溶剂挥干后，再交换溶剂提取1次，提取条件同第二次提取，合并滤液，40℃减压浓缩至圆底烧瓶中，回收溶剂，分别得乙酸乙酯和丙酮提取物浸膏，合并乙酸乙酯和丙酮提取物浸膏，得到盐渍萝卜粗提物，4℃贮存备用；

步骤三、盐渍萝卜粗提物的初步分离：将盐渍萝卜粗提物用甲醇溶解后过滤，40℃减压浓缩后上含170g填料的Sephadex LH-20凝胶柱，用甲醇作为洗脱剂进行洗脱，控制流速为5～9s/drop，使用自动收集器收集各流份，每60min收集1管，共收集得到128管流份；合并第48至第63管的流份，再进行减压浓缩，得到组分Y1；

步骤四、组分Y1的分离纯化：组分Y1用适量甲醇溶解后，直接上含170g填料的Sephadex LH-20凝胶柱，用甲醇作为洗脱剂进行洗脱，经若干次凝胶柱分离，最终收集得到31管流份，合并第11至第15管流份得310mg样品，将该部分标记为组分1-2；

步骤五、组分1-2的分离纯化：组分1-2加适量甲醇溶解后，过反相硅胶柱进行分离，以50％CH₃OH进行洗脱，洗脱体积为1L，每200mL收集1个流份，共收集得到5个流份，45℃减压浓缩除去溶剂后，选择第4个流份用正相硅胶进行分离；将正相硅胶分离后的4mg样品用20mg硅胶粉拌样，0.2g硅胶用石油醚饱和后装柱，样品上柱后，用石油醚进行洗脱，收集第97至第116管的流份，合并流份后浓缩，蒸干溶剂后，制得松脂素。

作为实施例的优选方式，所述步骤五中采用的正相硅胶柱进行分离的步骤为：

(1)硅胶粉活化

取200～300目硅胶粉于试剂瓶中，用扎孔的锡箔纸包好瓶口，置于110℃烘箱中活化2～3h，冷却后封好瓶口置于干燥器中，备用；

(2)拌样

根据样品的量4mg，向干净的圆底烧瓶中硅胶粉20mg，用胶头滴管吸取样品液滴至圆底烧瓶中的硅胶粉上，迅速搅拌均匀并间歇用电吹风给圆底烧瓶加热以使溶剂快速挥干，使样品呈均匀粉末状，如此重复，直至样品全部吸附于硅胶粉上，继续加热，使样品中的溶剂完全挥发，用滤纸封口后置于干燥器中备用；

(3)装柱