[发明专利]一种从盐渍萝卜中制备松脂素的方法

权利要求书

1.一种从盐渍萝卜中制备松脂素的方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一、盐渍萝卜干粉的制备：将盐渍萝卜切成薄片，于50℃下烘干，粉碎，过20目筛，得盐渍萝卜干粉，装于密封袋中，干燥器中保存备用；

步骤二、盐渍萝卜粗提物的制备：称取已烘干粉碎的5年盐渍萝卜粉2份，每份20g，分别置于2个500mL三角瓶中，按料液比1:15分别加入乙酸乙酯和丙酮，封口后置于摇床中，40℃，150rpm下提取6h，抽滤，收集滤液；再向残渣中加入相应溶剂进行第二次提取，在同样的条件下提取3h，抽滤，收集滤液，待残渣中溶剂挥干后，再交换溶剂提取1次，提取条件同第二次提取，合并滤液，40℃减压浓缩至圆底烧瓶中，回收溶剂，分别得乙酸乙酯和丙酮提取物浸膏，合并乙酸乙酯和丙酮提取物浸膏，得到盐渍萝卜粗提物，4℃贮存备用；

步骤三、盐渍萝卜粗提物的初步分离：将盐渍萝卜粗提物用甲醇溶解后过滤，40℃减压浓缩后上含170g填料的Sephadex LH-20凝胶柱，用甲醇作为洗脱剂进行洗脱，控制流速为5～9s/drop，使用自动收集器收集各流份，每60min收集1管，共收集得到128管流份；合并第48至第63管的流份，再进行减压浓缩，得到组分Y1；

步骤四、组分Y1的分离纯化：组分Y1用适量甲醇溶解后，直接上含170g填料的Sephadex LH-20凝胶柱，用甲醇作为洗脱剂进行洗脱，经若干次凝胶柱分离，最终收集得到31管流份，合并第11至第15管流份得310mg样品，将该部分标记为组分1-2；

步骤五、组分1-2的分离纯化：组分1-2加适量甲醇溶解后，过反相硅胶柱进行分离，以50％CH₃OH进行洗脱，洗脱体积为1L，每200mL收集1个流份，共收集得到5个流份，45℃减压浓缩除去溶剂后，选择第4个流份用正相硅胶进行分离；将正相硅胶分离后的4mg样品用20mg硅胶粉拌样，0.2g硅胶用石油醚饱和后装柱，样品上柱后，用石油醚进行洗脱，收集第97至第116管的流份，合并流份后浓缩，蒸干溶剂后，制得松脂素。

2.如权利要求1所述的一种从盐渍萝卜中制备松脂素的方法，其特征在于：所述步骤五中采用的正相硅胶柱进行分离的步骤为：

(1)硅胶粉活化

取200～300目硅胶粉于试剂瓶中，用扎孔的锡箔纸包好瓶口，置于110℃烘箱中活化2～3h，冷却后封好瓶口置于干燥器中，备用；

(2)拌样

根据样品的量4mg，向干净的圆底烧瓶中硅胶粉20mg，用胶头滴管吸取样品液滴至圆底烧瓶中的硅胶粉上，迅速搅拌均匀并间歇用电吹风给圆底烧瓶加热以使溶剂快速挥干，使样品呈均匀粉末状，如此重复，直至样品全部吸附于硅胶粉上，继续加热，使样品中的溶剂完全挥发，用滤纸封口后置于干燥器中备用；

(3)装柱

采用湿法装柱，称取0.2g硅胶用石油醚饱和后装柱；

(4)上样

采用干法上样，将吸附有样品的硅胶粉装至层析柱中，使其均匀沉降于硅胶层表面，待样品沉降完全，打开阀门，收集洗脱液；

(5)样品洗脱

梯度洗脱：先用初始洗脱剂对样品进行洗脱，然后逐渐增加洗脱剂的极性，洗脱过程中用泵加压并用薄层层析TLC追踪，直至目标点被洗脱；

(6)样品的收集与合并

用小试管分部收集样品，将含有目标点的样品管按照出柱顺序合并为几个部分，减压浓缩后，继续进行薄层层析，根据样品的具体情况继续进行分离或者合并浓缩后4℃贮藏备用。

3.如权利要求2所述的一种从盐渍萝卜中制备松脂素的方法，其特征在于：所述薄层层析TLC追踪为：将GF254硅胶板于110℃烘箱中活化2～3h，待其自然冷却至室温后取出，置于干燥器中备用，用玻璃毛细管吸取适量样品，点于硅胶板基线上，并在样点下端用铅笔做好标记，硅胶板上基线距板底端距离为0.8～1cm，两样点之间的距离不小于0.8cm，用吹风机吹干溶剂后，置于装有饱和层析液的层析缸中展开，待溶剂前沿展至距薄层板顶端约1cm时，用镊子取出，吹干溶剂，用紫外分析仪和其它显色剂进行显色。

4.如权利要求1所述的一种从盐渍萝卜中制备松脂素的方法，其特征在于：还包括松脂素的结构鉴定：将过正相硅胶柱后制得的松脂素装入核磁管中，蒸干溶剂，加入氘代试剂，以TMS作为内标，使用400MHz核磁共振仪测定化合物的核磁谱，测定项目包括¹H-NMR、¹³C-NMR、DEPT 90、DEPT 135、¹H-¹H COSY、HSQC、HMBC；将样品用含5％甲酸的甲醇溶液溶解后测定质谱，质谱条件：电离源：电喷雾电离源；干燥气温度：200℃；干燥气压力：20psi；雾化气压力：50psi；雾化室温度50℃；针孔电压：5000V；屏蔽电压：600V；毛细管电压：80V。