[发明专利]用于以RT‑LAMP法快速检测香蕉病毒的引物及方法

权利要求书

1.用于以RT-LAMP法快速检测香蕉重要病毒的引物，其特征在于：包括BBTV引物组、BSV引物组和CMV引物组，其中，BBTV引物组包括外引物对BBTV-F3和BBTV-B3，内引物对BBTV-FIP和BBTV-BIP，以及环引物对BBTV-LF和BBTV-LB；BSV引物组包括外引物对BSV-F3和BSV-B3，内引物对BSV-FIP和BSV-BIP，以及环引物对BSV-LF和BSV-LB；CMV引物组包括外引物对CMV-F3和CMV-B3，内引物对CMV-FIP和CMV-BIP，以及环引物对CMV-LF和CMV-LB，序列如下所示：

BBTV-F3：5'-CTA CTG ATA AAA CAT TAC CCA GAT-3'；

BBTV-B3：5'-TCC CCA CTA CAT ACC AGT T-3'；

BBTV-FIP：5'-CTC TTG ATC ATA GCC CAA TGA AGT ATG GAA AAT GTT TAT GCT TCT TGT-3'；

BBTV-BIP：5'-TCT TGG GAA ATC AAC CAG CCG TAACCAGAT GGC TAT GTT CAG-3'；

BBTV-LF：5'-CGG GCT TCACCT TGC AC-3'；

BBTV-LB：5'-TCT GGAAGC CCC AGG TTT AT-3'；

BSV-F3：5'-ATG CTAGGA GCT ACATTC C-3'；

BSV-B3：5'-TCC ACT TAC ATA CCC CTC C-3'；

BSV-FIP：5'-CCA GTC CTG AGT ATT CAT TCT TCT TGA AAC TGG GAA AAA TCC TTG G-3'；

BSV-BIP：5'-GAA GTT GTA GCT AAT CTG CCA GAA TCC ATA CAG CCA TCC GTT-3'；

BSV-LF：5'-GGA CTC GTT TTG GCA TAC AGT G-3'；

BSV-LB：5'-CTT GAG TTA CCC CCC GAA AAA GC-3'；

CMV-F3：5'-CGT AAA GTT CCT GCC TCC TC-3'；

CMV-B3：5'-GGT GCT CGA TGT CAA CAT GA-3'；

CMVI-FIP：5'-GGC TTG AAC TCC AGA TGC AGC AGC CGC CAT CTC TGC TAT G-3'；

CMV-BIP：5'-TTC GGT GAT GCG CGC TGA TAG TCT CGA GCG CAT CGT CT-3'；

CMV-LF：5'-AGT ACC GGT GAG GCT CCG TC-3'；

CMV-LB：5'-GGT GAC ATG AGA AAG TAC GCC GT-3'。

2.一种利用权利要求1所述的引物以RT-LAMP法快速检测香蕉重要病毒的检测方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)对样本进行处理，抽提样本RNA；

(2)直接以样本RNA为模板，利用权利要求1所述的引物以实时荧光RT-LAMP法进行检测。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于：所述的样本处理指抽提香蕉叶片RNA作为样本RNA。

4.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于：所述样本RNA在检测前进行DNase处理。

5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于：所述DNase处理反应体系及反应程序如下：RNA 2μL，10×Reaction Buffer 1μL，RQ1 RNase-Free DNase 1U/μg RNA，加6μL Nuclease-free water至终体积10μL，37℃反应30min；加入1μL RQ1DNase Stop Solution终止反应，65℃反应10min。

6.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于：所述RNA的抽提方法用植物RNA提取试剂盒进行抽提。