[发明专利]一种自体自然杀伤细胞鸡尾酒式培养的制备方法及其试剂盒产品有效
| 申请号： | 201510246516.9 | 申请日： | 2015-05-15 |
| 公开（公告）号： | CN104789527B | 公开（公告）日： | 2018-05-29 |
| 发明（设计）人： | 王俊荣;宋现让 | 申请（专利权）人： | 江苏杰晟生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783;A61K35/17;A61P35/00;A61P35/02 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 225300 江苏省泰州市(中国医药城*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 自然杀伤细胞 重组人白介素 鸡尾酒式 自体 试剂盒 制备 外周血单个核细胞 抗病毒 抗肿瘤 人MHC 杀伤 可用 增殖 潜能 癌症 激活 治疗 | ||
1.一种自体自然杀伤细胞鸡尾酒式培养的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：来自于癌症患者30ml外周血的单个核细胞，在10ng-50ng/ml重组人白介素15、10ng-50ng/ml重组人白介素18、10ng-50ng/ml重组人白介素21、10ng-50ng/ml重组人白介素12、10ng-50ng/ml重组人白介素7以及10ng-50ng/ml重组人MHC-I类链相关分子A六种细胞因子协同作用下激活自然杀伤细胞大量增殖，培养到21天细胞增殖倍数达到1000倍以上，所述自然杀伤细胞细胞经流式细胞仪检测后CD56+/CD16+表型均大于80％，CD3+细胞低于10％，并增强自然杀伤细胞的杀伤活性。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述制备自体杀伤细胞鸡尾酒式培养方法为：采集癌症患者30ml外周血，经淋巴细胞分离液密度梯度离心获得单个核细胞，将其在32ml的细胞培养基中，加入到细胞培养板中，在37℃、5％CO
鸡尾酒式激活培养5天后，将自然杀伤细胞用5mL移液管吹打后，吸取至新的细胞培养瓶中，并补充10-20mL新鲜细胞培养基；在37℃、5％CO
3.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其特征在于，所述细胞培养基为淋巴细胞无血清培养基加入50-500活性单位/mL重组人白介素2和体积比为10％的自体血清或胎牛血清；其含有500活性单位/mL重组人白介素2。
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