[发明专利]一种A型口蹄疫标记疫苗及其构建方法

权利要求书

1.一种A型口蹄疫标记疫苗，其特征在于所采用的种毒为具有SEQ ID NO：3基因片段的A/rV-2病毒，该基因片段编码的氨基酸序列为序列表SEQ ID NO：4，其缺失口蹄疫病毒3A蛋白的104-115位氨基酸。

2.如权利要求1的标记疫苗的构建方法，其特征在于包括如下步骤：1)A型口蹄疫病毒基因组全长cDNA重组质粒的构建；2)以步骤1)为基础，缺失口蹄疫病毒3A蛋白104-115氨基酸编码区的A型口蹄疫病毒基因组全长cDNA重组质粒的构建；3)以步骤2)为基础，拯救缺失3A蛋白104-115编码序列的A型口蹄疫病毒，作为A型口蹄疫标记疫苗的种毒。

3.根据权利要求2的方法，其特征在于步骤1)采用四组扩增引物分别扩增A型口蹄疫全基因组序列，四组引物分别为A1组引物SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6；A2组引物SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8；A3组引物SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10；A4组引物SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12。

4.根据权利要求3的方法，其特征在于步骤1)构建重组质粒的步骤为A1、A2组引物扩增片段进行融合PCR，融合后的片段与pSK载体分别经SphI/XbaI双酶切后连接转化得重组质粒pSK-A12，所得重组质粒与引物A3组扩增的片段分别用XbaI/Bgl II双酶切后连接转化得重组质粒pSK-A123；A4引物扩增的片段与pSK载体分别用Bgl II/NotI双酶切后连接转化得重组质粒pSK-A4；pSK-A123与pSK-A4分别用Bgl II/NotI双酶切后连接转化得含当前流行的A型口蹄疫病毒基因组全长cDNA的重组质粒pQAGD。

5.根据权利要求4的方法，其特征在于以pSK-A4为模板，分别用AGD1组引物和AGD2组引物扩增，所得扩增片段以SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：16引物进行融合PCR；融合的扩增片段以用Bgl II/Hind III酶消化，pSK-A4用Hind III/NotI酶消化，pSK-A1234用Not I/Bgl II消化，三片段连接得到含缺失3A蛋白104-115编码区的A型口蹄疫病毒基因组全长cDNA的重组质粒pQAGD/3A104-115；扩增所用引物为AGD1组引物：SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14；AGD2组引物：SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16。

6.权利要求1所述的A型口蹄疫标记疫苗在制备防控A型口蹄疫的药物中的应用。