[发明专利]一种雏鹅病毒性肝炎抗体及制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于兽用抗体制备领域，具体地涉及一种雏鹅病毒性肝炎抗体及制备方法和应用。

背景技术

多流行于冬春季的鸭甲型肝炎病毒(Duck Hepatitis A Virus；DHAV),是一种鸭急性接触性传播性病毒，1～2周雏鸭最易感。DHAV从基因型可分为1，2，3型，引起雏鸭发病的主要为1，3型病毒。DHAV主要导致雏鸭运动失调、转圈、两脚痉挛后踢,头向后背等神经症状，该病发病急,传播快,雏鸭常在发病后几个小时内死掉。近年来，有研究报道雏鹅发生病毒性肝炎，但由于病因复杂，尚未有明确的报道确定鹅的病毒性肝炎病原是鸭甲型肝炎病毒，对该病原也没有进行分类研究的报道。我们先前研究证明，从发病小鹅瘟的雏鹅肝脏中分离获得的病原为鸭甲型肝炎病毒基因3型，从而将该病原予以明确，并在此基础上研究发现该病毒基因3型也能够感染雏鹅，导致1～2周龄雏鹅发病并且死亡，且流行病学调查表明，发生小鹅瘟的雏鹅携带该病毒的阳性率较高，达到20～30％。

传统上，防治鸭甲型肝炎的方法是使用鸭肝炎抗体。通过利用灭活的鸭甲型肝炎疫苗对产蛋鸡进行多次免疫，可获得安全、高效的卵黄抗体。但是，尚没有文献报道对鹅源鸭甲型肝炎基因3型病毒感染雏鹅是如何进行治疗和预防的，也未见有制备相应的抗体的报道。

产蛋鸡易于规模化饲养，产蛋率高，是大批量生产卵黄抗体的理想动物。应用异源动物鸡制备卵黄抗体，不但减少了同源疫病传染的危险，也为研制其他疫病的异源高免卵黄抗体提供了有益的经验。

卵黄抗体是指从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体，由于卵黄中仅有IgG类抗体，故称其为卵黄免疫球蛋白IgG(egg yolkimmunoglobulins),简称为IgY。卵黄抗体的研究始于19世纪末，1893年，Klemperer发现了卵黄中富含抗体；1934年Jukes的实验证明母鸡血清中的抗体可以转移到卵黄中，从而为雏鸡提供被动免疫保护。Patters等的试验证实，相对别的血浆蛋白，IgG被选择性的转运到卵泡中。1969年，Leslie和Clem将这种抗体命名为IgY。

卵黄抗体的形成过程是：当机体受到外界特异性抗原(尤其是灭活抗原)的刺激后诱发一系列的免疫应答反应，激发B细胞分化成能分泌特异性抗体的浆细胞，分泌大量的特异性抗体进入血液中。同时在产蛋禽体内，血液中的特异性抗体IgG(所有亚群)由卵巢IgG受体的介导逐步进入到卵巢滤泡和输卵管中，并在卵黄中蓄积起来，也正是由于这种卵黄累积作用，使卵黄中的IgG明显地高于血清中的含量，而血清中的其他抗体(主要是IgM，IgA)与输卵管中的卵白白蛋白一起混入到鸡蛋白中。

卵黄抗体在多种环境中有较高的稳定性，在低于75℃条件下，卵黄抗体具有良好的热稳定性，90℃处理15min后，大部分卵黄抗体丧失结合活性，在pH＜4时，仅有少量卵黄抗体失去活性。在pH4-12范围内，卵黄抗体的结合活性几乎不受影响，在pH＞12时，卵黄抗体迅速失去结合活性。实验表明，卵黄抗体具有耐受反复冻融的特性，即使经过5次冻融，其抗原结合活性几乎不受影响。在室温下可保存6个月，4℃保存可达5年以上，活性仅下降5％左右。由于具有这些稳定的理化性质，所以其的开发应用备受人们所关注。

除上述理化特性外，卵黄抗体还有其他重要的生物学特性。卵黄抗体浓度高于血清IgG，单个卵黄(约15mL)含200mg左右的卵黄抗体，自卵黄中获得卵黄抗体较实验动物血清方便。且卵黄抗体不与哺乳动物补体、Fc受体结合，也不与葡萄球菌蛋白A(SPA)或链球菌蛋白G(SPG)结合，卵黄抗体还不与血清中的类风湿因子(RF)结合，可提高免疫学检测的准确性。因而可用卵黄抗体检测粪便中的病毒，因为粪便中经常含有大量SPA，用卵黄抗体检测可避免假阳性结果。卵黄抗体是独特的IgG同种型抗体，同时哺乳动物组织结构较禽类组织具有高度免疫性，卵黄抗体用于哺乳动物检测具有明显的优势，许多高度保守的抗原，在免疫动物后仅产生极小的免疫原性，却可用卵黄抗体进行区分，因此卵黄抗体可用于兽医和人类免疫学的检测。