[发明专利]一种桑葚提取物及其在制备肝脏细胞损伤抑制剂中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种桑葚提取物及其在制备肝脏细胞损伤抑制剂中的应用。

背景技术

桑葚(Mulberry)为桑科(Moraceae)桑属(Morus)浆果类果树，是重要的第三代小果类果树。果实未成熟时为绿色，逐渐成长变为白色、红色，成熟后为紫红色或紫黑色，味酸甜，柔软多汁且营养丰富，富含多糖、蛋白质、多种氨基酸和微量元素，还含有黄酮、多酚、花色苷等抗氧化活性物质，具有调节免疫力、防止血管硬化和防癌抗癌等功能。

如公开号为CN 104289088 A的中国专利文献公开了一种桑葚提取物在制备降糖药物中的应用。

自由基是机体内氧化反应产生的物质，具有很强的氧化性，现代研究表明，自由基是引起人体衰老和某些慢性疾病发生的原因之一，当人体内的自由基产生过多或清除过慢时，就会转而攻击各种细胞器官，损害机体的组织，进而引起慢性疾病及衰老效应并诱发各种疾病。

丙烯酰胺(Acrylamide，AA)俗称丙毒，是一种具有神经毒性和潜在致癌性的化学物质，它可作为化工原料，而富含淀粉的食品在热加工过程中也会产生丙烯酰胺。研究表明，丙烯酰胺具有神经毒性、遗传毒性以及致癌性，国际癌症研究机构(IARC)1994年对其致癌性进行了评价，将丙烯酰胺列为2类致癌物(2A)即人类可能致癌物。张希春等通过AA与大鼠肝切片共孵育，HPLC-MS/MS检测AA代谢性反应产物环丙氧酰胺(glycidamide，GA)的生成量，western blot分析细胞色素P4502E1(CYP2E1)蛋白的表达。剂量组(1.0、2.0、4.0mmol/L)随着AA浓度的增加，肝切片代谢生成的GA也随之增加，3种剂量组间差异显著(P＜0.05)(张希春,张敏爱.丙烯酰胺肝脏代谢与细胞色素P4502E1蛋白表达[J].现代预防医学,2007,34(5):910-911.)

肝脏是人体生物转化和解毒的重要器官，是AA进入人体后最初的代谢场所，能聚集高浓度的AA，而肝脏细胞色素P450中的CYP2E1作为一种代谢外来异物的单氧合酶，可将AA氧化为GA，GA比AA更具细胞毒性。因此，抑制丙烯酰胺对肝脏损伤的物质具有很大的研究意义。

发明内容

本发明公开了一种桑葚提取物，及其在制备由丙烯酰胺诱导的肝脏细胞氧化损伤的抑制剂中的新应用。

一种桑葚提取物，提取步骤如下：

桑葚鲜果依次经胃蛋白酶、胰蛋白酶酶解后，酶解液经分离得到上清液，所述上清液经过滤后截留分子量大于5kDa的成分，滤出液再经真空冷冻干燥，得到所述的桑葚提取物；

以质量百分比计，所述桑葚提取物包括：

矢车菊-3-O-葡萄糖苷(Cyanidin-3-O-glucoside)      58％～68％；

矢车菊-3-O-芸香糖苷(Cyanidin-3-O-rutinoside)     27％～39％；

天竺葵-3-O-葡萄糖苷(Pelargonidin-3-O-glucoside)  0.87％～4.44％；

天竺葵-3-O-芸香糖苷(Pelargonidin-3-O-rutinoside) 0.34％～1.48％。

本发明通过模拟人体胃肠道消化的方式，采用胃蛋白酶、胰蛋白酶等提取方式制备得到桑葚提取物。该桑葚提取物含有人体最终吸收的有效成分，最大限度的保留了有效成分，其功能性具有实用性；而通过传统方法提取的桑葚产物，进入人体后，一部分有效物质被人体消化系统分解消化，因而功能性具有不可预测性，不能代表进入人体后的真实情况。

作为优选，桑葚鲜果经胃蛋白酶酶解的具体步骤为：

桑葚鲜果与水等质量混合打浆，加入HCl调节pH＝1.5～2后得到匀浆，再加入胃蛋白酶，37℃、100～200rpm下水浴振荡2～3h，得到混合浆液。

进一步优选，所述HCl的浓度为5mol/L；

所述胃蛋白酶的加入量为5000～7000单位胃蛋白酶/20g匀浆。

作为优选，胰蛋白酶酶解的具体步骤为：

取经胃蛋白酶酶解得到的混合浆液，加入NaOH调节pH＝6～7，再加入胰液，然后用NaHCO3调节pH至7.2～7.5，37℃，100～200rpm水浴振荡2～3h后，得到酶解液。

进一步优选，所述NaOH的浓度为1mol/L，NaHCO₃的浓度为1mol/L。