[发明专利]一种T-2毒素的酵母菌发酵去除方法

说明书

技术领域

本发明属于生物化学技术领域，具体涉及一种T-2毒素的酵母菌发酵去除方法。

背景技术

T-2毒素属于真菌毒素，是毒性最强的单端孢霉烯族毒素，是由产毒真菌在适宜的环境条件下产生的有毒代谢产物，经常污染食品(特别是粮食制品)和饲料，对人类和动物具有多种毒害作用，国内外对粮谷、食品和饲料中的T-2毒素制定了严格的限量标准。

酵母菌可以去除某些真菌毒素，最早研究酵母菌去除真菌毒素是Ciegler等(1966)、Mann等(1977)，他们研究了酵母菌对黄曲霉毒素脱毒作用。Scott等(1995)、Torres等(2001)报道了啤酒和蒸馏酒生产中黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A的消长规律。Scott等(1996)报道含有酵母菌细胞壁的酒糟能将黄曲霉毒素吸附。上述酿酒酵母使家禽动物具有抗黄曲霉毒素的能力(Devegowda等，1998；Stanley等，1993)。Santin等(2003)报道了酵母菌细胞壁作为家禽动物的饲料添加剂，能降低黄曲霉毒素的毒效应。到目前为止，研究最多是利用酵母菌对黄曲霉毒素进行脱毒，但尚没有没有报道酵母菌对T-2毒素具有去除作用，更没有摸索其可以工业化应用的条件。

发明内容

本发明的目的在于提供一种T-2毒素的酵母菌发酵去除方法。

一种T-2毒素的酵母菌发酵去除方法，按照如下步骤进行：

(1)酵母菌菌种的活化和培养，制成酵母菌培养液，培养液中活菌数含量为1×10⁸-1×10⁹CFU/mL；

(2)向含有T-2毒素的污染粮食中喷洒酵母菌培养液，喷洒量为污染粮食质量的1％；

(3)常温发酵3-6天，将被污染粮食取出，晒干。

所述酵母菌菌种为食品发酵级菌种Saccharomyces cerevisiae 1221。

所述粮食为小麦、大麦、玉米、高粱、稻谷。

所述酵母菌培养液的制备方法为：将保存的食品级酵母菌菌株接种于YPD(Yeast Extract Peptone Dextrose medium，YPD)平板，于30℃培养箱中有氧培养48h，挑起单菌落接入YPD液体培养基中，于30℃培养箱中150r/min有氧振荡培养48h，再按1％接种量接种于YPD液体培养基中，30℃培养箱中150r/min有氧振荡培养30-60h，在到达稳定生长期时，活菌数为1×10⁸-1×10⁹CFU/mL时，取出培养液。

所述常温发酵温度为20℃-30℃。

本发明的有益效果：本发明的方法可以有效的去除被污染粮食和饲料中的T-2毒素，操作方法简单，去除率高，可应用于粮食和饲料中T-2毒素的脱毒，以使其达到国家标准。

附图说明

图1为酵母菌的生长曲线。

图2为T-2毒素的多反应监测(MRM)色谱图截图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明做进一步说明。

实施例1酵母菌发酵对T-2毒素去除作用实验

酵母菌培养基YPD培养基，购于德国SERVA Electrophoresis GmbH公司，称取50g于1000mL超纯水中，用玻璃棒搅拌至完全溶解，分装至三角瓶，121℃高压灭菌20min，制成YPD液体培养基，4℃保存。灭菌前在其中添加1.5％的琼脂，灭菌后倒平板，制成YPD平板，4℃保存。

毒素标准储备液制备：精确称取购于美国Sigma-Aldrich公司的T-2毒素标准品5.0mg于5mL容量瓶中，用乙腈溶解、定容，制成1.0mg/mL T-2毒素准储备液，于-20℃条件下避光保存，使用前拿出置于室温条件下30min，每次使用不超过1h，每月更新。

毒素标准工作液制备：将T-2毒素标准储备液用5％甲醇水溶液(初始流动相)、YPD液体培养基、PBS缓冲液稀释、定容，制成100.0μg/mL、10.0μg/mL、1.0μg/mL、0.1μg/mL、0.01μg/mL的毒素标准工作液、YPD液体培养基基质标准工作液、PBS缓冲液基质标准工作液，于4℃条件下避光保存，使用前拿出置于室温条件下30min，每次使用不超过2h，每10天更新。

酵母菌菌株为食品发酵常用的食品级酵母菌菌株Saccharomyces cerevisiae 1221。