[发明专利]一株近平滑假丝酵母重组菌高效制备(S)-苯基乙二醇的方法

权利要求书

1.一株不对称转化制备(S)-苯基乙二醇的原位表达(S)-羰基还原酶II的近平滑假丝酵母重组菌，其分类命名为近平滑假丝酵母菌/(S)-羰基还原酶II（Candida parapsilosis pCP-scrII），已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：M2015107。

2.利用权利要求1所述的原位表达近平滑假丝酵母重组菌不对称转化制备(S)-苯基乙二醇的方法，其特征是将(S)-羰基还原酶II在近平滑假丝酵母中表达后，利用培养后的重组菌株C parapsilosis pCP-scrII，以2-羟基苯乙酮为底物，催化不对称转化反应：在1 mL 0.1 mol/L pH 4.5~5.5的醋酸缓冲液中，或1 mL 0.1 mol/L pH 6.0~7.0的磷酸缓冲液中，或1 mL 0.1 mol/L pH 7.5~9.0的Tris-HCl缓冲液中，加入重组菌细胞浓度为0.1 g/mL，底物2-羟基苯乙酮浓度为6 g/L，反应温度20-40℃，反应时间45 h。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征是重组菌株C parapsilosis pCP-scrII的培养：

生长培养基YPD以g/L计：胰蛋白胨20，酵母提取物10，葡萄糖20，以去离子水配制；固体培养基添加琼脂粉 20；

发酵培养基以g/L计：酵母提取物5，葡萄糖40，(NH₄)₂HPO₄ 13，KH₂PO₄ 7，ZnSO₄·7H₂O 0.3，NaCl 0.1，pH 7.0，以去离子水配制；

培养条件：挑取重组菌株C parapsilosis pCP-scrII的单菌落接种于5 mL YPD液体培养基中，于28℃、200 r/min振荡培养12 h；取1 mL培养液转接于50 mL 发酵培养基中，于28℃、200 r/min振荡培养36 h。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征是重组菌株C parapsilosis pCP-scrII的构建：

将带有Kpn I同义突变位点的目的基因scrII插入大肠杆菌和近平滑假丝酵母表达载体pCP中，构建重组质粒pCP-scrII，重组质粒pCP-scrII转化近平滑假丝酵母感受态细胞，通过含有40 μg/mL诺尔斯菌素的YPD平板筛选目的重组菌株C. parapsilosis pCP-scrII。