[发明专利]青海弧菌Q67B及其分离筛选和应用

说明书

本发明涉及青海弧菌Q67B(CCTCC NO：M2010104)及其分离筛选和应用，属微生物学的发光细菌分离筛选和应用的技术领域，该菌是从青海省青海湖所产的青海鳇鱼体表采集到的发光菌，经分离纯化，再经温度适应性筛选，又经pH值适应性筛选，最后经毒物反应灵敏性筛选，得到的一种淡水发光菌。该菌在清洁水体中发光恒定，接触到毒物，其发光强度会明显衰减，据此可推定毒物的毒性大小及毒物的浓度。在用于地表水如内陆河流湖泊、地下水及排放污水的毒性检测时，可在10℃～37℃下进行，无需调节水样渗透压和pH值，10～15分钟内就可判别水样的毒性大小，快速、方便、灵敏。上述优点是海洋发光菌所不具备的。

本申请为申请日2013年1月18日、申请号为2013100196775、名称为“青海弧菌Q67B及其分离筛选和应用”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及青海弧菌Q67B及其分离筛选和应用，属微生物学的发光细菌分离筛选和应用的技术领域。青海弧菌Q67B是淡水发光菌。从青海省青海湖所产的青海鳇鱼体表采集淡水发光菌，经分离、纯化、筛选后，得到一种新的淡水发光菌种菌株，16SrDNA序列分析表明，该菌属弧菌属，定名为“青海弧菌Q67B(Vibrio qinghaiensis Q67B)”。2010年1月28日将其送交武汉市中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏编号为CCTCC NO：M2010104，保藏中心地址为：中国武汉市武汉大学典型培养物保藏中心，邮编：430072。

背景技术

发光菌是一大类能自身发出荧光的细菌，在条件合适时，其发光恒定。若发光菌接触到有毒有害物质时，其发光就会受抑制，抑制程度与所接触的毒物的毒性大小和毒物的浓度有关。因此发光菌可用于检测样品的生物学毒性。上世纪八十年代，发光菌就己被用于环境污染的检测。我国也于1995年发布了将发光菌用于水环境污染的毒性检测的国家标准。但不管国际还是国内，均使用来源于海洋的海洋发光菌，该发光菌适应海洋的高盐度(相当于NaCl的质量百分浓度为3％)和高渗透压的环境条件，否则无法生长，更不会发光。当用于陆地淡水样品时，必须在淡水样品中添加NaCl，直至淡水样品中NaC1的最终质量百分浓度为3％，否则淡水样品中的海洋发光菌很快就丧失发光能力，甚至细菌的细胞因低渗透压而吸水破裂，无法继续进行检测。上世纪九十年代，随着发光菌应用于环境污染的毒性检测日益增多，许多研究者发现，对有些种类的淡水样品，其检测结果往往与其它生物检测结果不太吻合，尤其是那些含有重金属盐的样品。究其原因，乃对淡水样品添加NaCl所致。所以有研究者改用葡萄糖取代NaCl来调节渗透压，使之与质量百分浓度为3％的NaCl溶液等渗，但效果并不理想，检测结果的重复性较差。这是因为海洋发光菌必需要有一定浓度的Na离子存在时才能保持良好而稳定的发光性能，缺乏Na离子的环境对海洋发光菌的发光是不利的，必然影响到海洋发光菌发光的稳定性，最终导致检测结果的严重偏差。如果使用不需要Na离子并适应较低的渗透压就能正常发光的淡水发光菌作为检测用发光细菌，对淡水样品就不必添加NaCl，避免了应用海洋发光菌作为检测用发光细菌的不足。

发明内容

本发明的一个目的是公开一种青海弧菌Q67B，其特征在于，

(1)形态特征：该菌的菌体呈杆状微弯，大小介于0.5～0.7微米×1.5～2微米，革兰氏染色阴性，用利夫生鞭毛染色，观察到单极生鞭毛似蝌蚪状，细胞内累积聚β-羟基丁酸；

(2)生理生化特征：该菌适于生长的温度范围和pH范围分别为4℃～40℃和pH5～pH10，对弧菌抑制剂2，4-二氨基-6，7-二异丙基喋啶敏感，具有耐盐、耐高渗透压和低渗透压的能力，能在介于质量百分浓度0％～8％之间的NaCl溶液中生长和发光；

(3)基因特征：16SrDNA序列：