[发明专利]青海弧菌Q67B及其分离筛选和应用

权利要求书

1.一种青海弧菌Q67B，其特征在于，

所述青海弧菌Q67B的保藏号为CCTCC NO:M2010104；

(1)形态特征：该菌的菌体呈杆状微弯，大小介于0.5～0.7微米×1.5～2微米，革兰氏染色阴性，用利夫生鞭毛染色，观察到单极生鞭毛似蝌蚪状，细胞内累积聚β-羟基丁酸；

(2)生理生化特征：该菌适于生长的温度范围和pH范围分别为4℃～40℃和pH5～pH10，对弧菌抑制剂2，4-二氨基-6，7-二异丙基喋啶敏感，具有耐盐、耐高渗透压和低渗透压的能力，能在介于质量百分浓度0％～8％之间的NaCl溶液中生长和发光；

(3)基因特征：16SrDNA序列：

AGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCCATGCCGCGTGTATGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGTACTTTCAGTCGTGAGGAAGGTGGTGTTGTTAATAGCAGCATCATTTGACGTTAGCGACAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCGAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCATGCAGGTGGTGGATTAAGTCAGATGTGAAAGCCCGGGGCTCAACCTCGGAACCGCATTTGAAACTGGTTCACTAGAGTACTGTAGAGGGGGGTAGAATTTCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATCTGAAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACAGATACTGACACTCAGATGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCTACTTGGAGGTTGTGGCCTTGAGCCGTGGCTTTCGGAGCTAACGCGTTAAGTAGACCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGCGGTTTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTACTCTTGACATCTACAGAATCCTGCGGAGACGCGGGAGTGCCTTCGGGAACTGTAAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTTGTGAAATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATCCTTGTTTGCCAGCACGTAATGGTGGGAACTCCAGGGAGACTGCCGGTGATAAACCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGAGTAGGGCTACACACGTGCTACAATGGCGCATACAGAGGGCAGCAAGCTAGCGATAGTGAGCGAATCCCAAAAAGTGCGTCGTAGTCCGGATTGGAGTCTGCAACTCGACTCCATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTAGATCAGAATGCTACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGCTGCACCAGAAGTGGTTAGTTTAACCGCACTTTCTTCGGAGAGAGTGGAGGACGATCACCACGGTGTGGTTCATGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAACC。

2.根据权利要求1所述的青海弧菌Q67B，其特征在于，该菌最适于生长的温度和pH值分别为25℃的和pH9.0。

3.一种用权利要求1所述的青海弧菌Q67B检测毒物的生物毒性的方法，其特征在于，具体操作步骤：

第一步 菌液制备：取青海弧菌Q67B的菌种斜面1支，转接于试管斜面上，20℃培养18小时，再转接一次，20℃培养18小时，发光明亮，用蒸馏水1ml～2ml洗下斜面上的菌苔，转入烧杯，稀释至光密度0D600为0.03，得到菌液，立即用于以下操作；

第二步 被测样品溶液制备：

若被测样品为固体，用质量百分浓度介于0％～8％的NaCl溶液配制浓度分别为0.1mg/L、1mg/L、10mg/L、100mg/L、1000mg/L的被测样品溶液，若被测样品为液体，用质量百分浓度介于0％～8％的NaCl溶液稀释成如下浓度梯度的被测样品溶液：100％(V/V)、75％(V/V)、50％(V/V)、25％(V/V)、10％(V/V)；

第三步 发光检测：取测光仪的专用测量杯12个，将第二步所述的每种浓度的被测毒物溶液注入2个测量杯，注入量为2ml，在余下的2个测量杯，各注入2ml质量百分浓度介于0％～8％的NaCl溶液，作空白对照，为每个测量杯注入第一步制备的菌液，注入量为50μl，15分钟后，用测光仪测量各测量杯的发光强度，按下式计算各测量杯的相对发光强度：

第四步 得到被测毒物的EC50值：以相对发光强度为纵座标，被测样品浓度为横座标，将第三步的计算得到的相对发光强度分别记在各自的对应的被测毒物溶液的浓度位点上，找出的相对发光强度50％时对应的被测毒物溶液的浓度，就是被测毒物的EC50值。