[发明专利]基于均相化学发光技术的快速诊断试纸条

说明书

技术领域

本发明涉及一种基于均相化学发光技术的快速诊断试纸条。

背景技术

均相化学发光(Amplified Luminscent Proximity Homogeneous Assay,AlphaLISA)是一种新型的免疫检测技术。均相化学发光技术整个过程中不需要洗涤，操作非常简单，灵敏度高。并且，均相化学发光动态范围宽(3-5个数量级)，亲和范围大(高低亲和力的抗体均可应用)，抗干扰能力强，易于实现自动化。已广泛用于药物筛选，其检测原理如图1所示。在均相条件下将带有染料的供体微球、包被有活性分子且带有发光化合物的受体微球以及检测样本混合。此时供体微球和包被有活性分子的受体微球可迅速有效地捕捉靶分子而形成免疫夹心复合物。在680nm的激发光照射下，供体微球中的光敏物质受到激发并催化周围的氧分子形成高能态的单线态氧，该高能态的单线态氧扩散至受体微球，产生一系列的化学发光反应，最后将能量传递给铕，发射出波长为615nm的信号。由于单线态氧在溶液中维持活性的时间很短(约4us)，只能扩散约200nm的距离，因此只有那些通过待测物质连接在一起的受体微球和供体微球才能产生信号，当生物分子不存在特异的相互作用时，单线态氧无法扩散到受体微球，则不会产生信号。

均相化学发光技术具有以下特点：

1、不用洗涤：

反应在液体均相中进行，只需要按次序加入样品、受体微球、供体微球后温浴，就可以进行检测，无需洗涤，操作简便，自动化程度高，可在96孔板、384孔板、1536孔板、3456孔板中进行反应，可高通量，自动化检测大量样品。

2、高灵敏度：

均相化学发光技术的检测灵敏度较高，这是因为供体微球含有高密度的光敏剂，每个微球每秒可释放高达60000个单线态氧分子，极大的扩增了信号。

3、适合生物大分子及相互作用的检测：

单线态氧分子在溶液中可以扩散到200nm的距离，故在小于200nm的距离供体微球与受体微球之间的相互作用均可以被检测到，因此应用光激化学发光技术可检测完整蛋白质、酶复合体、唾菌体等复杂的生物大分子及相互间的作用。其他均相技术，如时间分辨荧光、荧光偏振，仅限于直径为10nm以内的分子的检测。由于均相化学发光技术具有以上特点，已主要被应用到药物的大规模筛选方面。

胶体金免疫层析技术的原理是以硝酸纤维素膜为固相载体，以胶体金作为示踪标记物，与抗体结合，在微孔膜的渗滤作用或毛细管作用下，利用抗体反应的高度特异性和胶体金特有的颜色对金标抗体与二抗的结合进行示踪，显示肉眼可见的红色条带或斑点，从而实现对待测物的定性或定量分析。胶体金是由氯金酸在柠檬酸三钠、白磷或其他还原剂的作用下，聚合成大小不同的金颗粒，金颗粒之间是依赖于静电作用，因而呈现一种稳定的胶体状态，故而称为胶体金。因为胶体金颜色比较明显，肉眼即可辨别，因此无需任何仪器；检测速度快，只需要10分钟左右；产品为干式，没有液体，运输和保存方便；操作简单等特点。胶体金免疫层析试纸条得到了广泛应用。根据胶体金标记目标物的不同分为夹心法、间接法和竞争抑制法。夹心法和间接法主要针对大分子待测物，而对于小分子待测物因其分子量比较小，空间结构简单，一般采用竞争抑制法。但是，胶体金试纸条具有灵敏度偏低，容易产生假阳性等缺点，很多需要高灵敏度检测的物质使用胶体金试纸条的方法达不到要求。因此，胶体金免疫层析试纸条的检测方法还不能满足很多临床检测的需要，急需进行改进。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种基于均相化学发光技术的快速诊断试纸条，该诊断试纸条具有特异性强、灵敏度高、快捷、简便、可定量，适合快速诊断等优点。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种基于均相化学发光技术的快速诊断试纸条，包括PVC底板、样品垫、玻璃纤维垫、包被C线(即，控制线)以及T线(即，测试线)的硝酸纤维素膜、吸水垫；

在PVC底板的上表面固定设置硝酸纤维素膜，在硝酸纤维素膜的两侧分别设有玻璃纤维垫和吸水垫；除玻璃纤维垫的右端下表面与硝酸纤维素膜的左端上表面固定相连之外，玻璃纤维垫的其余下表面与PVC底板的上表面固定相连；除吸水垫的左端下表面与硝酸纤维素膜的右端上表面固定相连之外，吸水垫的其余下表面与PVC底板的上表面固定相连；在玻璃纤维垫的左侧还设有样品垫，除样品垫的右端下表面与玻璃纤维垫的左端上表面固定相连之外，样品垫的其余下表面与PVC底板的上表面固定相连。

作为本发明的基于均相化学发光技术的快速诊断试纸条的改进：

玻璃纤维垫中包被有偶联了特异性抗体Ⅰ的供体微球；