[发明专利]引物组、试剂盒及其在HPV全基因组检测中的用途

说明书

技术领域

本发明涉及病毒检测领域，具体的，本发明涉及一组引物、该组引物在HPV基因组的扩增和/或HPV的检测中的用途、一种试剂盒、该试剂盒在HPV基因组扩增、HPV分型和/或HPV检测中的用途，以及一种获得HPV全基因组序列的方法。

背景技术

宫颈癌是世界上第三大常见女性肿瘤，并且86％病例发生在发展中国家[Arbyn M,Castellsague X,de Sanjose S,Bruni L,Saraiya M,Bray F,FerlayJ:Worldwide burden of cervical cancer in 2008.Ann Oncol2011,22:2675–2686.]。据世界范围内统计，每年大约有46万左右新发病例，有超过20万的妇女死于宫颈癌，世界每年发病的75-80％在发展中国家，中国由于人口众多，每年新发病例超过13万之多，占到世界发病的25％，且近年来处于增长趋势，在广大农村地区增高趋势更加明显，并呈现发病年龄提前的现象[开丽比努·依马木,马彩玲.宫颈癌的诊断治疗进展[J].地方病通报,2006,21(6):62-65.]。

1977年ZurHause首先提出人乳头瘤病毒(Human papillomavirus，HPV)是宫颈癌致病因素的假设；1992年，世界卫生组织(WHO)宣布人乳头瘤病毒是引起宫颈癌变的首要因素；1995年，国际癌症研究署(IARC)专题讨论会将HPV感染确定为宫颈癌的主要病因，明确宫颈癌是一种感染性疾病。HPV感染是宫颈癌发生的主要因素。

人乳头瘤病毒是乳多空病毒科(Papovaviridae)A亚群内的一组DNA病毒，无包膜，相对分子质量为5×10⁶。基因组呈双链闭环状，含有7900对碱基。人乳头状瘤病毒是一个全球范围来，广泛传播的DNA病毒，主要感染人的粘膜及皮肤。研究表示99.7％的宫颈癌组织中可以检测到HPV病毒。

HPV双链环状基因组DNA，主要包括四个部分，早期区域，晚期区域，上游调控区和在E5及L2之间极短的高突变率的非编码区。乳头状瘤病毒进化速度缓慢，以每年2±0.5×10^-8个碱基突变频率进行。同时进化过程也呈现出组织及宿主特异性，导致HPV基因组多态性在进化过程中，只随机发生在各型别少数病毒亚型内[Bernard H U,Burk R D,Chen Z,et al.Classification of papillomaviruses(PVs)based on 189PV types and proposal of taxonomic amendments(J).Virology,2010,401(1):70-79.]。

现有研究表明，HPV致病分子机制是病毒基因组DNA的复制和表达，其中早期基因区E1、E2、E4、E5、E6和E7转录是HPV在宿主细胞增殖的关键步骤[IARC Working Group on the Evaluation of Carcinogenic Risks to Humans.IARC Monographs on the evaluation of carcinogenic risks to humans[M].World Health Organization,2007.]，目前对于HPV与宫颈癌发生的研究仅局限在高危型HPV型别之间，很少探讨亚型致癌性的不同。