[发明专利]脂肪间充质干细胞及其制剂的制备方法和用途

权利要求书

1.一种脂肪间充质干细胞的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：获得脂肪，预处理、酶解、离心，收集沉淀，获得脂肪间充质干细胞；

步骤2：培养所述脂肪间充质干细胞，当所述脂肪间充质干细胞生长至80％融合时，弃培养液，加PBS清洗，再加EDTA-胰酶溶液消化，终止消化、离心，传代培养。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1中所述预处理为加PBS洗涤、离心。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，步骤1中所述酶解为采用0.5％Ⅰ型胶原酶，37℃、100R消化50min；所述Ⅰ型胶原酶与所述脂肪的体积比为0.5～1：1。

4.根据权利要求1至3任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤2所述培养采用完全培养基调整细胞密度为1×10⁵cell/mL，添加1μg/mL EGF，于5％CO₂、37℃、饱和湿度为95％的条件下培养；所述完全培养基包括DMEM/F12和10％FBS。

5.根据权利要求1至4任一项所述的制备方法，其特征在于，所述EDTA-胰酶溶液中EDTA-胰酶的浓度为0.25w/v％，所述脂肪间充质干细胞贴壁面积与EDTA-胰酶溶液的比例为：每10cm²的面积添加0.5～1ml EDTA-胰酶溶液，所述消化的时间为1～2min。

6.根据权利要求1至5任一项所述的制备方法，其特征在于，所述传代培养具体为加入完全培养基和EGF，于5％CO₂、37℃、饱和湿度为95％的条件下培养；所述完全培养基包括DMEM/F12和10％FBS，所述细胞传代培养接种密度为1×10⁵cell/mL。

7.一种脂肪间充质干细胞制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤

步骤1：如权利要求1至6任一项所述的制备方法获得的脂肪间充质干细胞；

步骤2：将所述脂肪间充质干细胞传代培养至P3代时，收集上清液，更换培养液；

步骤3：重复步骤2，合并上清液，超滤浓缩，冻干，获得上清液冻干粉；

步骤4：将所述脂肪间充质干细胞传代培养至P3代时，经胰酶消化，收集获得干细胞，以HClO₄溶液裂解，离心，收集上清液；

步骤5：将步骤4获得的上清液经碱液中和，离心，收集上清液；

步骤6：将步骤5获得的上清液与活性炭混合、洗涤、碱液洗脱后，调节pH值为中性，获得干细胞提取物；

步骤7：将步骤3获得的上清液冻干粉与步骤6获得的干细胞提取物混合。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤3获得的上清液冻干粉与步骤6获得的干细胞提取物的质量比为50～100：1。

9.根据权利要求8所述的脂肪间充质干细胞制剂的制备方法获得的脂肪间充质干细胞制剂。

10.根据权利要求9所述的脂肪间充质干细胞制剂在制备抗衰老的药物、食品、保健品、化妆品中的应用。