[发明专利]嵌合抗原受体双阴性T细胞的构建方法

权利要求书

1.一种嵌合抗原受体双阴性T细胞的构建方法，其特征在于：根据CD3⁺/CD4^－/CD8^－双阴性T细胞的特性，体外分选出纯化的CD3⁺/CD4^－/CD8^－双阴性T细胞，利用多种细胞因子信号通路和TCR信号通路协同作用的原理，筛选出适合于双阴性T细胞激活和病毒转染的体外培养方案，能够快速、可控的激活双阴性T细胞，并将特定的嵌合抗原受体用慢病毒转染技术高效率表达于双阴性T细胞上，制备出CAR－DN－T细胞，使其能特异性的识别嵌合抗原受体对应的肿瘤细胞，促进CAR－DN－T细胞的进一步活化和增殖，并快速杀伤肿瘤细胞。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于：所述体外分选方案为，利用CD4/CD8生物素标记抗体阴性分选和CD3/CD28磁珠标记抗体阳性分选联合使用，分选出高纯度的CD3⁺/CD4^－/CD8^－双阴性T细胞，然后对纯化的双阴性T细胞加入特定配比混合的细胞因子混合液刺激，培养72小时后进行嵌合抗原受体病毒转染，得到高比例的CAR－DNT细胞。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述细胞因子混合液包括：IL－2、IL－15、GMCSF、TNFα、IFNγ。