[发明专利]用于检测津优406号黄瓜杂交种子纯度的核苷酸序列及检测方法在审
| 申请号： | 201510170947.1 | 申请日： | 2015-04-13 |
| 公开（公告）号： | CN104726607A | 公开（公告）日： | 2015-06-24 |
| 发明（设计）人： | 韩毅科;崔兴华;杜胜利;魏爱民;刘楠;陈正武;赵海燕 | 申请（专利权）人： | 天津科润农业科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 天津市杰盈专利代理有限公司 12207 | 代理人： | 朱红星 |
| 地址： | 300192 *** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 检测 406 黄瓜 杂交 种子 纯度 核苷酸 序列 方法 | ||
【权利要求书】：
1.用于检测津优406号黄瓜杂交种子纯度的核苷酸序列,其特征在于所述的核苷酸序列具有：SEQ ID NO:1-2所示的核苷酸序列。
2.一种采用权利要求1所述核苷酸序列检测津优406号黄瓜杂交种子纯度的方法, 其特征在于按如下的步骤进行:
提取津优406号黄瓜杂交种子基因组DNA；
进行PCR扩增：在PCR扩增专用薄壁管中加入津优406号黄瓜杂交种子基因组DNA 10～20ng，再加入上游引物15～30ng、下游引物15～30ng、1倍的含Mg2+的PCR缓冲液、dNTP 2mmol、Taq DNA聚合酶 0.5～1单位，加无菌重蒸馏水至10μl;将PCR扩增专用薄壁管放入PCR仪中扩增，扩增条件为：94 ℃预变性180 秒；94 ℃变性30秒,50-55℃退火30 秒,72℃延伸60 秒 ，30个循环；再72℃延伸7 min，扩增完成；
PCR扩增产物的凝胶电泳分析：将扩增产物采用6%变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离；在扩增产物中加入变性凝胶上样缓冲液，上样于经30分钟预电泳的变性聚丙烯胺凝胶上，70W恒功率电泳至溴酚兰刚刚到达凝胶的另一端，凝胶经硝酸银染色后在可见光下观察、照相，依据被鉴定样品在凝胶上条带的相对位置，检测津优406号黄瓜杂交种子纯度。
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