[发明专利]一种荧光探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种荧光探针，其特征在于所述的荧光探针的结构式如(Ⅰ)所示：

2.一种权利要求1所述的荧光探针的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

1)中间体1的合成：在N₂保护下，将Cy7荧光染料、无水乙腈和甲胺水溶液混合后，于常温下反应，TLC跟踪反应终点，将反应物过硅胶柱，干燥，得中间体1；

2)中间体2的合成：在N₂保护下，于冰水浴中，将硫代乙酸和2-碘乙醇混合，缓慢滴加1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯，然后将混合液于室温下反应，TLC追踪反应终点，将反应物过硅胶柱，得中间体2；

3)中间体3的合成：在N₂保护下，于冰水浴中，将中间体1、无水二氯甲烷和三乙胺混合，缓慢滴加三光气的甲苯溶液，然后将混合液于室温下搅拌反应，TLC追踪反应终点，至反应液由蓝色变为绿色，将反应液在真空状态下旋干，无水乙醚洗涤，收集滤饼，得中间体3；

4)荧光探针的合成：在N₂保护下，将中间体2、中间体3和三乙胺混合，于30-40℃下反应，TLC追踪反应终点，得到目标产物荧光探针。

3.根据权利要求2所述的荧光探针的制备方法，其特征在于：步骤1)中，Cy7荧光染料与甲胺的摩尔比为1:1-1.5；TLC跟踪反应终点的展开剂为，按体积比，乙酸乙酯:甲醇＝2-4:1。

4.根据权利要求2所述的荧光探针的制备方法，其特征在于：步骤2)中，硫代乙酸、1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯和2-碘乙醇的摩尔比为1-1.5:1-1.5:1；TLC跟踪反应终点的展开剂为二氯甲烷。

5.根据权利要求2所述的荧光探针的制备方法，其特征在于：步骤3)中，中间体1、三乙胺与三光气的摩尔比为1:15-25:5-7；TLC跟踪反应终点的展开剂为，按体积比，乙酸乙酯:甲醇＝10:1。

6.根据权利要求2所述的荧光探针的制备方法，其特征在于：步骤4)中，三乙胺、中间体2和中间体3的摩尔比为1-1.5:2-2.5:1-1.5；TLC跟踪反应终点的展开剂为乙酸乙酯：甲醇＝10：1。

7.权利要求1所述的荧光探针在半胱氨酸的定性和/或定量检测中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于方法如下：分别将权利要求1所述的荧光探针和待测物溶于PH＝5-9的磷酸盐缓冲溶液中，分别取两种溶液，然后加入体积比为1:1的PH＝5-9磷酸盐缓冲溶液和二甲基亚砜的混合液，混合均匀，得工作液，测量该工作液在λex＝650nm，λem＝750nm下的荧光发射光谱。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述的磷酸盐缓冲溶液的PH＝7.4。