[发明专利]一种来自水稻的磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI1及其应用

权利要求书

1.一种高等植物来源的磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI1，其特征在于，该磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI1分离、克隆自水稻。

2.根据权利要求1所述的磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI1，其特征在于，所述磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI1的核苷酸序列包含下述序列或者由下述序列构成：

3.一种原核表达载体，其特征在于，所述原核表达载体包含权利要求1或2所述的磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI1。

4.一种用于鉴定所述磷酸甘露糖异构酶的酶活分析方法，其特征在于，所述鉴定方法包括：利用两步偶联法对包含权利要求1所述的磷酸甘露糖异构酶基因的编码蛋白或权利要求3所述的原核表达载体的表达蛋白进行酶活分析。

5.一种表达盒，其特征在于，所述表达盒中包含权利要求1或2所述的磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI1。

6.一种植物表达载体，其特征在于，所述植物表达载体包含权利要求1或2所述的磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI1和/或权利要求5所述的表达盒。

7.一种利用含有权利要求1中所述的磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI1的植物表达载体获得植物转化细胞的方法，包括下述步骤：

(1)将植物种子去壳、灭菌后将胚分离出来，置于愈伤组织诱导培养基上以产生次级愈伤组织；

(2)将所述次级愈伤组织转移至新的愈伤组织诱导培养基进行预培养，获得能够用于转化的愈伤组织；

(3)将步骤(2)中获得的愈伤组织与农杆菌接触5-30分钟，其中，所述农杆菌中引入了所述植物表达载体，所述植物表达载体中携带所述的磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI1；

(4)将步骤(3)处理后的愈伤组织转移到其上垫有无菌滤纸的培养皿中，在预定温度下培养24-72小时；

(5)将步骤(4)处理后的愈伤组织置于前筛选培养基上培养3-10天；

(6)将步骤(5)处理后的愈伤组织转移至筛选培养基上，以获得抗性愈伤组织，所述筛选培养基中包含甘露糖，所述抗性愈伤组织为能够代谢甘露糖的植物转化细胞。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述植物为水稻，所述植物转化细胞为水稻转化细胞。

9.一种权利要求1或2所述磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI1、权利要求5所述的表达盒、权利要求6所述的植物表达载体的应用，其特征在于，所述应用包括利用所述磷酸甘露糖异构酶基因OsPMI1作为筛选标记，基于权利要求7所述的方法获得植物转化细胞，并利用所述植物转化细胞获得转基因植物或植物部分。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述植物包括：粮食作物、蔬菜作物、花卉作物、能源作物；所述植物部分包括：细胞、原生质体、细胞组织培养物、愈伤组织、细胞块、胚芽、花粉、胚珠、花瓣、花柱、雄蕊、叶、根、根尖、花药和种子。