[发明专利]一种可控性的核酸抽提法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术和医学领域，特别涉及一种可控性的核酸抽提法。

背景技术

近年来血清或血浆中的核酸分析在疾病的早期检测和应用方面显示了很多优势。传统的血清或血浆的核酸抽提法，对小量的血清或血浆样本限制很多，同时处理样本时使用蛋白酶，既造成了样本核酸抽提不稳定性，也因为酶的作用，损失了相当大的比例的核酸成分，使用起来限制多，又很不方便。有些基因的突变，在大的非突变基因的背景中，根本检测不到，没有好的浓缩方法。已报道的磁珠核酸抽提法，是直接将磁珠试剂加入到试样中，一方面磁珠容易损坏核酸样本，另一方面，结合前处理(如：高温处理)会破坏和降低磁珠的结合效率。有报道称，磁珠抽提核酸法容易随机丢失大量的核酸样本，无法有效控制所需检测基因的核酸抽提的质和量。

发明内容

本发明的目的是为解决上述问题而提供了一种可控性的核酸抽提法，可以从血清或血浆或生物体液中利用可控性探针和特异性磁珠相结合，来提取所需核酸的方法。

本发明所采用的技术方案是：

一种可控性的核酸抽提法，包括以下步骤：

(1)将特殊标记的核酸探针加入需要抽提核酸的试样中，让所述核酸探针与所述试样中的核酸相结合；

(2)将可以与上述(1)中的核酸探针相结合的修饰磁珠加入到步骤(1)所述的试样中，使所述核酸探针的标记部位与磁珠表面的修饰物相结合；

(3)用磁场吸附和收集上述磁珠，从而所述试样中的核酸样本也得到富集、分离和抽提；

(4)将核酸样本从磁珠或磁铁上释放出来，用于各种核酸检测和分析。

进一步地，所述特殊标记的核酸探针在普通的核酸探针上加上一个或多个特定的化学分子结构。

优选地，所述特定的化学分子结构是可以和磁珠或磁珠表面的修饰物在一定的条件下相结合的；所述特定的化学分子结构为生物素(Biotin)，可以和磁珠表面的亲和素(Strepavidin)稳定结合。

优选地，所述特殊标记的核酸探针包括脱氧核糖核酸、核糖核酸探针及两者的杂交结构、或生物代替物的探针，探针序列包括随机探针序列和特异性核酸探针序列。

优选地，所述试样包括血清、血浆、体液、各种试剂液或由细胞或组织由来的细胞裂解液。

进一步地，所述核酸探针与所述试样中的核酸相结合适合有高温处理，酸碱处理以及急速冷却处理，结合稳定并有特异性等特点。

进一步地，所述磁珠表面修饰物指的是能和探针标记物相结合的分子结构，包括亲和素(Strepavidin)，该种结合是可以在一定条件(酶处理，高温处理和试剂处理)下分开。

优选地，所述磁场包括使用电磁铁、永久磁铁或两者兼用。

进一步地，所述步骤(4)的从磁铁或磁珠上释放核酸产物的方法，包括酶切反应，加温和试剂处理。

进一步地，所述步骤(4)从磁铁上，释放磁珠或核酸时，可在磁铁上套上非磁性套，使要捕获的磁珠体，先结合在插有磁铁的塑料套表面，当抽去磁铁后，磁珠体就容易释放下来。

进一步地，所述试样中的核酸包括使用标记的随机核酸探针抽提全脱氧核糖核酸，全核糖核酸以及小分子核糖核酸，使用标记的特殊核酸序列结构的定位核酸探针抽提特定基因或相应核酸序列结构的目标核酸，包括大分子和小分子核酸分子。

进一步地，使用特殊核酸序列结构的定位核酸探针，可以从抽提好的核酸试样中，浓缩所需核酸。

该方法的发明原理核心是用标记好的核酸探针，加入到试验样本中，与样本中的核酸结合。核酸探针的标记可以结合到磁珠表面的修饰物，此时加入该种磁珠到样本中，就可以与核酸探针的标记部位相结合，用磁场吸附原理，吸附磁珠，所需的核酸样本也就从试样中被抽提出来，直接作为样本检测核酸，或作收集后处理，获得纯化的目的核酸。

本发明具有以下优点：