[发明专利]用烤烟低次烟叶制备多糖和/或烟用香膏的方法

权利要求书

1.一种用烤烟低次烟叶制备多糖和烟用香膏的方法，其特征在于它包括以下步骤：

步骤一、将烤烟低次烟叶粉碎过40-60目筛；

步骤二、称取样品与水混合，其中样品与水的质量比为1:20-1:30，再通过功率400-600W超声提取7-10min；

步骤三、以转速9000-11000r/min于3-5℃温度下离心13-17min，取离心后上清液，于65-75℃减压蒸发，浓缩至体积的1/6至1/4；

步骤四、取浓缩液，加入体积为浓缩液3-5倍的无水乙醇，在3-5℃醇析43-53h；再以转速9000-11000r/min离心，离心后的上清液用于制香膏，将下部沉淀用于精制多糖；

步骤五、将步骤四中的上清液用稀硫酸调节pH至2.5-3.5，静置3.5-4.5h后，以9000-11000r/min转速离心，取上清液，于65-75℃下减压蒸发浓缩至膏状，即制得烟用香膏；将得到的烟用香膏用同时蒸馏法萃取进行气质联用分析香味成分，量取流动状膏体10mL放入同时蒸馏萃取装置一端的1000mL平底烧瓶中，加入300mL蒸馏水，用电子调温电热套加热，装置的另一端蒸馏瓶中注入50mL二氯甲烷，于60℃水浴中加热，同时蒸馏萃取2.5h后，加入1mL内标乙酸苯乙酯，浓度为0.3765mg/mL，将二氯甲烷萃取液60℃浓缩至约1mL，低温密封保存，用于GC/MS分析，采用内标法对香味物质进行定量，假定相对校正因子为1，对各种香味物质按照下式进行定量计算，

将步骤四中的下部沉淀用蒸馏水溶解，采用Sevage法脱蛋白，至两相间无明显的蛋白沉淀，然后利用丙酮脱色，3-5℃醇析10-14h，再次离心取沉淀，经真空冷冻干燥，得到烟叶粗多糖；

步骤六、称取烟叶粗多糖以mg计35-45份，用以mL计3-5份的0.15-0.25mol/L NaCl缓冲液溶解，经0.20-0.24μm的水相滤膜过滤，依次经DEAE-52纤维素柱和Sepharose CL-6B层析柱分离，用0.15-0.25mol/L的NaCl缓冲液以0.5-0.7mL/min的流速洗脱，再根据多糖组分分类收集，冷冻干燥，即为精制多糖。

2.根据权利要求1所述的用烤烟低次烟叶制备多糖和烟用香膏的方法，其特征在于所述步骤六中称取烟叶粗多糖以mg计40份，用以mL计4份的0.2mol/L NaCl缓冲液溶解，经0.22μm的水相滤膜过滤，依次经DEAE-52纤维素柱和Sepharose CL-6B层析柱分离，用0.2mol/L的NaCl缓冲液以0.6mL/min的流速洗脱。

3.根据权利要求2所述的用烤烟低次烟叶制备多糖和烟用香膏的方法，其特征在于所述步骤六中还包括：用硫酸-苯酚法检测多糖，用紫外-可见分光光度计在波长280nm处直接检测蛋白，按照检测结果将同一组分的多糖收集在一起，浓缩透析后，冷冻干燥，即为精制多糖。

4.根据权利要求1所述的用烤烟低次烟叶制备多糖和烟用香膏的方法，其特征在于所述步骤三中以转速10000r/min于4℃温度下离心15min，取离心后上清液，于70℃减压蒸发，浓缩至体积的1/5。

5.根据权利要求1所述的用烤烟低次烟叶制备多糖和烟用香膏的方法，其特征在于所述步骤四中取浓缩液，加入体积为浓缩液4倍的无水乙醇，在4℃醇析48h，再以转速10000r/min离心。

6.根据权利要求1所述的用烤烟低次烟叶制备多糖和烟用香膏的方法，其特征在于所述步骤五中：

将步骤四中的上清液用稀硫酸调节pH为3，静置4h后，以10000r/min转速离心，取上清液，于70℃下减压蒸发浓缩至膏状，即制得烟用香膏。

7.根据权利要求1所述的用烤烟低次烟叶制备多糖和烟用香膏的方法，其 特征在于所述步骤五中：

将步骤四中的下部沉淀用蒸馏水溶解过程中，采用4℃醇析12h。

8.根据权利要求1所述的用烤烟低次烟叶制备多糖和烟用香膏的方法，其特征在于烤烟低次烟叶提余物用于制备有机肥或烟草薄片。