[发明专利]激酶活性测定方法、ATP衍生物及其用途及制造方法

权利要求书

1.激酶活性的测定方法，其包括：

(A)使含激酶的被检样品、上述激酶的底物和含二硝基苯基(DNP)的腺苷三磷酸(ATP)衍生物反应，得到含向上述底物导入DNP基的含有DNP基的底物的混合物的工序、

(B)将上述工序(A)中得到的混合物和与上述DNP基结合的抗体混合，使含有上述含DNP基的底物和上述抗体的复合物形成的工序、及

(C)通过检测上述复合物而测定上述激酶的活性的工序，

其中上述ATP衍生物是DNP基经接头结合于ATP的γ位的磷酸基的化合物。

2.权利要求1所述的方法，其中在上述工序(B)中，上述复合物在固相载体上形成。

3.权利要求2所述的方法，其中

在上述工序(B)中，上述复合物的形成在溶液中进行，

在上述工序(B)及(C)之间，还包括分离上述形成了复合物的固相载体和上述溶液的工序。

4.权利要求2所述的方法，其中上述固相载体是磁性粒子。

5.权利要求1所述的方法，其中上述激酶是细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)。

6.权利要求1所述的方法，其中上述激酶是CDK1或CDK2。

7.权利要求1所述的方法，其中所述底物是具有下式(a1)所表示的氨基酸序列SEQ ID NO:1的底物肽：

Xaa¹-Pro-Xaa²-Xaa³   (a1)

其中，

Xaa¹表示丝氨酸残基或苏氨酸残基、

Xaa²表示任意的氨基酸残基、

Xaa³表示赖氨酸残基或精氨酸残基。

8.权利要求1所述的方法，其中

上述抗体是含标记物质的被标记抗体，

在上述工序(C)中，通过检测上述复合物中的标记物质来测定上述活性。

9.权利要求1所述的方法，其中上述ATP衍生物由下式(I)所表示：

式中，

X¹表示直接键、氧原子或硫原子、

L¹表示接头部分、

R¹表示可与上述L¹及上述DNP的双方连结的反应基、

DNP表示二硝基苯基。

10.腺苷三磷酸(ATP)衍生物，其为二硝基苯基经接头结合于ATP的γ位的磷酸基的ATP衍生物。

11.权利要求10所述的ATP衍生物，其由下式(I)所表示：

式中，

X¹表示直接键、氧原子或硫原子、

L¹表示接头部分、

R¹表示可与上述L¹及上述DNP的双方连结的反应基、

DNP表示二硝基苯基。

12.用于在权利要求1～9之任一项所述的激酶活性的测定方法中使用的腺苷三磷酸(ATP)衍生物，其为二硝基苯基经接头结合于ATP的γ位的磷酸基的ATP衍生物。

13.权利要求12所述的ATP衍生物，其由下式(I)所表示：

式中，

X¹表示直接键、氧原子或硫原子、

L¹表示接头部分、

R¹表示可与上述L¹及上述DNP的双方连结的反应基、

DNP表示二硝基苯基。

14.用于在权利要求1～9之任一项所述的激酶活性的测定方法中使用的试剂盒，其含有：

激酶的底物，

含二硝基苯基(DNP)的腺苷三磷酸(ATP)衍生物，及

与上述DNP基结合的抗体，

其中上述含DNP基的ATP衍生物是DNP基经接头结合于ATP的γ位的磷酸基的化合物。