[发明专利]香豆素衍生物的制备、药理作用及治疗脑缺血的应用

说明书

本发明涉及一种用于治疗脑缺血的香豆素衍生物7，8‑羟基‑4‑三氟甲基‑苯并吡喃‑2‑酮(7,8‑dihydroxy‑4‑trifluoromethyl‑2H‑chromen‑2‑one)的制备及其分子药理学机制及脑缺血动物模型等方面的药效学研究，以及适用于脑缺血治疗的制剂学研究。该活性化合物的药理作用机制明确，用于治疗脑缺血模型确定有效，可用于治疗脑缺血的临床应用。

技术领域

本发明属于药物化学、药理学与制剂领域，具体包括活性香豆素衍生物的合成与纯化、药理作用机制研究、治疗脑缺血、脑中风、脑水肿、脑梗死、神经功能损伤的用途、制剂。

背景技术

香豆素类化合物是一类具有芳香气味的天然产物，具有苯并α-吡喃酮母核，可视为顺式邻羟基桂皮酸脱水形成的内酯，是重要的药用天然活性化合物，以香豆素为主要有效成分的中药-补骨脂、祖师麻、秦皮、蛇床子、前胡等，以苯并α-吡喃酮为基本母核，通过化学合成与修饰的方法制备非天然的香豆素衍生物，对于探讨与发现这一类结构母核新的药理活性及构效关系研究，具有重要的研究意义。

瞬时感受器电位离子通道(transient receptor potential ion channel，TRPchannel)是一类在外周和中枢神经系统分布很广泛的阳离子通道蛋白，TRP家族主要由七个亚族组成：TRPC、TRPV、TRPM、TRPML、TRPP、TRPA和TRPN。TRP受到多种因素的调节，包括渗透压、pH值、机械力以及一些内、外源性配体和细胞内信号分子，其参与生物体内感觉信息传递如视觉、温度觉、痛觉和触觉等，并且具有调节胞内Ca²⁺平衡等多种重要的生理功能。

TRPV3通道于2002年首次被发现，有三个不同实验室发现了其可以被温热温度(32℃-39℃)激活。随后的研究发现，该通道还可以被合成化合物2-APB、樟脑、胞内氢离子激活。TRPV3通道在人体内分布广泛，在感觉神经元如背根神经节、三叉神经节和皮肤角质细胞中大量表达。对于TRPV3的生理功能，目前研究认为其与人体的温度感受密切相关。另外，由于TRPV3较为特殊的在皮肤角质细胞中的表达，一系列相关研究发现了TRPV3与脱发、瘙痒等皮肤疾病的相关性，但具体机制尚不明了。2012年，Lin et al首次发现了TRPV3突变导致的一种严重的皮肤系统遗传疾病——Olmsted综合症，也暗示着TRPV3在生理、病理过程中扮演的重要角色。

FlexStation3技术是一种基于钙荧光的高通量筛选技术。它的主要原理是：应用可以与钙离子特异性结合的染料孵育细胞，细胞内含有大量可结合钙离子的未发光染料分子。当所表达通道激活后大量钙离子内流，与胞内的染料结合并发出荧光。通过读取荧光值的强度，由其强度变化反应离子通道的开合。该方法适用于96孔板或384孔板，可以一次性筛选多种化合物，实现高通量筛选。

研究离子通道活性及评估化合物对其作用的方法是利用电生理技术进行检测，因其直接、灵敏的优点而成为了检测离子通道的“金标准”。电生理膜片钳技术是应用玻璃微电极在细胞膜表面形成高阻封接，将细胞上的离子通道接入放大器、电极、浴液组成的电环路，给予细胞不同刺激，通过人工钳制细胞的膜电位而观察记录电环路中的电流改变情况，从而反映离子通道的开合。

Transient receptor potential vanilloid-3(TRPV3)是非选择性通透钙离子的阳离子通道，在皮肤表皮细胞 广泛的表达。TRPV3可被非伤害性的温觉刺激和伤害性的热觉刺激激活。随着人们对TRPV3通道的研究加深，发现点突变导致的TRPV3功能上调导致皮肤溃烂、产生剧烈瘙痒及疼痛；敲除TRPV3，在AEW处理的慢性瘙痒模型中，搔抓反应明显减少；而且在研究过敏性皮炎患者时发现TRPV3的表达量明显增高。据此，人们认为TRPV3有可能成为治疗瘙痒疾病的一个作用靶点。