[发明专利]石柑子HPLC指纹图谱的构建方法及其HPLC指纹图谱

说明书

技术领域

本发明涉及中药质量检测技术领域，特别是涉及一种石柑子HPLC指纹图谱的构建方法及其HPLC指纹图谱。

背景技术

柑子是天南星科石柑属植物石柑子Pothos chinensis(Raf.)Merr.的干燥全草，是瑶医老班药“五虎、九牛、十八钻、七十二风”之一的葫芦钻。石柑子性平，味淡，具有祛风除湿、活血散瘀、消积止咳的功效，在瑶族地区常用于治疗跌打损伤、风湿骨痛，疗效显著。由于中药成分复杂，仅凭单一指标难以准确评价中药的质量。中药指纹图谱是指某种(某产地)中药所共有的具有特征性的某类或某几类成分的色谱或者光谱图谱。中药指纹图谱因其具有整体性、模糊性和可量化的特点，能够全面地反应中药的内在质量，目前已成为中药质量控制最有效的方法之一。

但目前尚无石柑子药材的质量标准，对石柑子药材质量的控制就显得非常薄弱，只包括显微鉴别等常规性检查，缺乏完善的质量评价体系，难以达到对石柑子质量的有效控制。

发明内容

本发明的目的在于提供石柑子HPLC指纹图谱的构建方法，该方法采用高效液相色谱(HPLC)建立其指纹图谱，并用相似度软件进行评价，可全面地对石柑子的质量进行评价，保证药材质量的稳定性及临床用药的有效性与安全性。

其具体的技术方案如下：

一种石柑子HPLC指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：

(1)供试品溶液的配制：取石柑子粉末(过四号筛)2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再次称重，用50％甲醇补足减失的重量，过滤，精密吸取续滤液10ml，蒸干，残渣加50％甲醇溶解并定容至2ml，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，即得；

(2)对照品溶液的制备：精密称定阿魏酰酪胺、丁香酸、香草酸对照品适量，分别加甲醇制成每1ml含阿魏酰酪胺60.42μg、丁香酸120.14μg和香草酸71.25μg的混合溶液，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，即得；

(3)高效液相色谱分析：

精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪中，

色谱条件如下：色谱柱：Thermo ODS-2Hypersil色谱柱，填料粒径5μm，柱长250mm，柱内径4.6mm；

流动相：以甲醇为流动相A，体积百分含量为0.4％的磷酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式：从0-15min，流动相A的体积百分含量由10％提高至20％，流动相B的体积百分含量由90％降低至80％；从15-25min，流动相A的体积百分含量为20％，流动相B的体积百分含量为80％；从25-35min，流动相A的体积百分含量由20％提高至25％，流动相B的体积百分含量由80％降低至75％；从35-45min，流动相A的体积百分含量由25％提高至28％，流动相B的体积百分含量由75％降低至72％；从45-50min，流动相A的体积百分含量为28％，流动相B的体积百分含量为72％；从50-60min，流动相A的体积百分含量由28％提高至32％，流动相B的体积百分含量由72％降低至68％；从60-70min，流动相A的体积百分含量由32％提高至40％，流动相B的体积百分含量由68％降低至60％；从70-90min，流动相A的体积百分含量由40％提高至70％，流动相B的体积百分含量由60％降低至30％；从90-120min，流动相A的体积百分含量为70％，流动相B的体积百分含量为30％；检测波长：300nm；柱温：30℃；流速：1.0ml/min；

(4)测定24批石柑子药材并进行分析比较，得到由其共有特征峰构成的石柑子HPLC的标准指纹图谱。

所述的石柑子HPLC指纹图谱的构建方法，其还包括以下步骤：

(5)所述标准指纹图谱的精密度、重现性及稳定性试验，

(51)精密度试验：

取同一供试品溶液，连续进样6次，以11号峰为参照峰，计算出1-16号共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD值均小于3％，同时用相似度评价软件计算各色谱指纹图谱的相似度均大于0.990，表明仪器稳定，精密度良好；

(52)重现性试验：