[发明专利]石柑子HPLC指纹图谱的构建方法及其HPLC指纹图谱

权利要求书

1.石柑子HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，该方法包括以下步骤和条件：

(1)供试品溶液的配制：

取石柑子粉末2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再次称重，用50％甲醇补足减失的重量，过滤，精密吸取续滤液10ml，蒸干，残渣加50％甲醇溶解并定容至2ml，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，即得；

(2)对照品溶液的制备：

精密称定阿魏酰酪胺、丁香酸、香草酸对照品适量，分别加甲醇制成每1ml含阿魏酰酪胺60.42μg、丁香酸120.14μg和香草酸71.25μg的混合溶液，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，即得；

(3)高效液相色谱分析：

精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪中；

色谱条件为色谱柱：Thermo ODS-2 Hypersil色谱柱，填料粒径5μm，柱长250mm，柱内径4.6mm；

流动相：以甲醇为流动相A，体积百分含量为0.4％的磷酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式：从0-15min，流动相A的体积百分含量由10％提高至20％，流动相B的体积百分含量由90％降低至80％；从15-25min，流动相A的体积百分含量为20％，流动相B的体积百分含量为80％；从25-35min，流动相A的体积百分含量由20％提高至25％，流动相B的体积百分含量由80％降低至75％；从35-45min，流动相A的体积百分含量由25％提高至28％，流动相B的体积百分含量由75％降低至72％；从45-50min，流动相A的体积百分含量为28％，流动相B的体积百分含量为72％；从50-60min，流动相A的体积百分含量由28％提高至32％，流动相B的体积百分含量由72％降低至68％；从60-70min，流动相A的体积百分含量由32％提高至40％，流动相B的体积百分含量由68％降低至60％；从70-90min，流动相A的体积百分含量由40％提高至70％，流动相B的体积百分含量由60％降低至30％；从90-120min，流动相A的体积百分含量为70％，流动相B的体积百分含量为30％；检测波长：300nm；柱温：30℃；流速：1.0ml/min；

(4)测定24批石柑子药材并进行分析比较，得到由其共有特征峰构成的石柑子HPLC的标准指纹图谱。

2.根据权利要求1所述的石柑子HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，其还包括以下步骤：(5)所述标准指纹图谱的精密度、重现性及稳定性试验，

(51)精密度试验：

取同一供试品溶液，连续进样6次，以11号峰为参照峰，计算出1-16号共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD值均小于3％，同时用相似度评价软件计算各色谱指纹图谱的相似度均大于0.990，仪器稳定，精密度良好；

(52)重现性试验：

取同一批石柑子粉末，精密称取6份，按步骤(51)下供试品制备方法平行制备6份供试品溶液，分别进样，以11号峰为参照峰，计算出1-16号共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD值均小于3％，所述石柑子HPLC指纹图谱的构建方法重现性良好；

(53)稳定性试验：

取同一份供试品溶液，分别于0，2，4，8，16，24h进样检测，以11号峰为参照峰，计算出1-16号共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD值均小于3％，供试品溶液在24小时内稳定。

3.一种通过权利要求1所述石柑子HPLC指纹图谱的构建方法得到的石柑子HPLC指纹图谱，其特征在于，石柑子HPLC的标准指纹图谱是由16个共有指纹峰构成，该石柑子HPLC的标准指纹图谱具有的16个共有峰的相对保留时间tg分别为：0.178min、0.268min、0.309min、0.354min、0.411min、0.488min、0.507min、0.633min、0.730min、0.922min、1.000min、1.318min、1.326min、1.525min、1.544min、1.579min。