[发明专利]土壤中植物病原菌含量的检测方法

权利要求书

1.土壤中植物病原菌含量的检测方法，包括如下S1)和S2)：

S1)、用提取土壤微生物DNA的方法提取待测土壤微生物DNA，得到待测土壤微生物DNA；

S2)、以所述待测土壤微生物DNA为模板，用鉴定植物病原菌的成套试剂进行荧光定量PCR，通过PCR产物的荧光强度确定所述待测土壤中所述植物病原菌的含量；所述鉴定植物病原菌的成套试剂由鉴定所述植物病原菌的PCR引物对和探针组成；所述PCR引物对由序列表中SEQ ID No.1所示的单链DNA和SEQ ID No.2所示的单链DNA组成；所述探针的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.3所示；

S1)所述提取土壤微生物DNA的方法包括如下S21)和S22)的步骤：

S21)向所述土壤中加入提取缓冲液得到细胞悬液；

S22)向所述细胞悬液中加入SDS得到细胞裂解液，所述细胞裂解液中的SDS的质量百分比浓度为4％，裂解细胞，得到裂解液；除去所述裂解液中的杂质得到所述待测土壤微生物DNA；

所述提取缓冲液由溶剂和溶质组成；所述溶剂为磷酸缓冲液，所述溶质及其浓度为1M Tris-HCl、0.1M EDTA、1.5M NaCl、质量百分比浓度为2％的CTAB、质量百分比浓度为2％PVP；所述磷酸缓冲液由溶质和溶剂组成的缓冲液，所述溶剂为水，所述溶质为NaH₂PO₄和Na₂HPO₄，所述NaH₂PO₄在所述磷酸缓冲液中的浓度为6.8mM，所述Na₂HPO₄在所述磷酸缓冲液中的浓度为93.2mM，所述磷酸缓冲液的pH为8.0；

S21)包括下述S21a)和S21b)：

S21a)向所述土壤中加入所述提取缓冲液得到土壤悬液；所述土壤的量为100g；

S21b)破碎所述土壤悬液中的土壤颗粒得到所述细胞悬液；

S21a)中所述土壤悬液中土壤颗粒的直径在50微米以下；

S21b)中所述破碎所述土壤悬液中的土壤颗粒为德国Retsch生产的PlanetaryBall Mill PM400仪器处理所述土壤悬液；所述处理的时间为5-20分钟；

所述植物病原菌为十字花科根肿病菌。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述提取土壤微生物DNA的方法中，所述除去所述裂解液中的杂质得到所述待测土壤微生物DNA包括S22a)和S22b)：

S22a)向所述裂解液中加入PEG溶液除去所述裂解液中的杂质得到DNA溶液；

S22b)用PVPP除去所述DNA溶液中的杂质得到所述待测土壤微生物DNA；

所述PEG溶液由水、NaCl和PEG组成；所述PEG溶液中所述NaCl的浓度为1.6M，所述PEG的质量百分浓度为30％-50％。