[发明专利]一种炎症诱导蛋白组分、其制备方法及产品

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，更具体地，涉及一种炎症诱导蛋白组分、其制备方法及产品。

背景技术

促炎物质，是一类可介导多种免疫反应。近期研究发现，促炎可介导肿瘤细胞坏死，是有前景的抗肿瘤物质。

目前市场上常用的促炎物质，脂多糖LPS促炎效果强烈，用量不易准确控制，副作用强烈。因此继续开发新型的促炎物质，如炎症诱导蛋白等。

发明内容

针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本发明提供了一种炎症诱导蛋白组分、其制备方法及产品，其目的在于提供一种促炎效果稳定可控副作用小的促炎蛋白，由此解决目前脂多糖促炎物质促炎效果强烈，用量不宜准确控制，副作用大的技术问题。

为实现上述目的，按照本发明的一个方面，提供了一种炎症蛋白组分为荔枝蛋白提取物，经鸟枪法质谱分析包括蛋白，检测得到的肽段覆盖率在10％以上的蛋白质包括：ADP核糖基化因子1(ADP-ribosylation factor 1)、3-磷酸甘油醛脱氢酶GAPC1(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPC1)、Actin-7、14-3-3样蛋白GF14λ(14-3-3-like protein GF14lambda)、泛素-40S核糖体蛋白S27a-1(Ubiquitin-40S ribosomal protein S27a-1)、14-3-3样蛋白GF14ω(14-3-3-like protein GF14omega)、14-3-3样蛋白GF14υ(14-3-3-like protein GF14upsilon)、钙调蛋白1(Calmodulin-1)、真核起始因子4A-1(Eukaryotic initiation factor 4A-1)。

按照本发明的另一方面，提供了一种所述炎症诱导蛋白组分的制备方法，包括以下步骤：

(1)将新鲜荔枝去皮、除核并榨碎制得匀浆，固液分离后保留上清液；

(2)将步骤(1)中制得的上清液浓缩，透析48至96小时得到粗提物，截流量在8KD至14KD之间；

(3)对步骤(2)中制得的粗提物进行冷冻干燥，并采用酚提法提取蛋白质，经丙酮洗涤后氮气吹干，得到所述炎症诱导蛋白组分。

优选地，所述制备方法，其步骤(2)所述透析时间为72小时，截流量为8KDa。

优选地，所述制备方法，其步骤(3)所述酚提法提取蛋白质的具体步骤为：

(3-1)称取粗提物冷冻干燥粉末加入预冷的酚提取缓冲液中制得混合液，添加量在5mg/mL至8mg/ml之间；

(3-2)将步骤(3-1)中制得的混合液提纯一次或多次，提纯步骤为：加入等体积预冷的Tris饱和酚溶液，混合均匀后震荡离心取上层酚相；

(3-3)在步骤(3-2)中提取的酚相中加入提前预冷的0.05M至0.15M的乙酸铵的甲醇溶液，添加体积比在1:2至2:1之间，静置使蛋白沉淀，并分离得到蛋白质沉淀。

(3-4)将步骤(3-3)得到的蛋白质沉淀中，加入丙酮洗涤2次，氮气吹干，得到所述炎症诱导蛋白组分。

优选地，所述制备方法，其步骤(3-1)所述的酚提取缓冲液为含有700mM蔗糖、100mM氯化钾、500mM三羟甲基氨基甲烷以及63.7mM EDTA的水溶液，其pH＝7.5。

按照本发明的另一个方面，提供了一种促炎制剂，其特征在于，包括所述炎症诱导蛋白组分。

总体而言，通过本发明所构思的以上技术方案与现有技术相比，由于从天然温和成分中提取炎症诱导蛋白组分，能够取得下列有益效果：

(1)本发明提供的炎症诱导蛋白组分，促炎效果明确且温和，用量容易控制，天然物质提取无副作用。

(2)本发明提供的方法，原料易得，过程安全，适合大规模生产。

附图说明

图1是实施例4中LWP蛋白组分使得COX-2mRNA表达水平变化；

图2是实施例4中LWP蛋白组分使得iNOS mRNA表达水平变化；

图3是实施例4中LWP蛋白组分使得IL-1βmRNA表达水平变化；

图4是实施例4中LWP蛋白组分使得HO-1mRNA表达水平变化。

具体实施方式