[发明专利]心肌肌钙蛋白I和心型脂肪酸结合蛋白联检试纸制备方法

权利要求书

1.一种心肌肌钙蛋白I和心型脂肪酸结合蛋白联检试纸的制备方法，其特征在于，包括步骤为：（1）将三羟甲基氨基甲烷、蔗糖、海藻糖和牛血清白蛋白溶于水并定容，调节pH值至8-9，得到金标稀释液，用0.01M磷酸二氢钠溶液调节0.01M磷酸氢二钠溶液的pH值至7-8，得到包被缓冲液；

（2）往搅拌的胶体金中加入0.2M碳酸钾，调节pH，加入待标记物并搅拌，再加入0.1g/mL牛血清白蛋白溶液，离心得到沉淀，所述沉淀用所述金标稀释液重悬至离心前体积的1/10，其中所述待标记物为cTnI 标记抗体时得到cTnI免疫金，所述待标记物为H-FABP 标记抗体时得到H-FABP免疫金；

（3）用包被缓冲液稀释cTnI 包被抗体和H-FABP包被抗体分别得到cTnI检测线包被液、H-FABP检测线包被液，用包被缓冲液稀释羊抗鼠IgG多抗得到对照线包被液；

（4）通过点膜喷金设备用cTnI 标记抗体和H-FABP 标记抗体标记的混合液对金垫喷金得到喷金的金垫，其中所述cTnI 标记抗体和H-FABP 标记抗体标记的混合液是由所述cTnI免疫金和所述H-FABP免疫金混合得到的，用所述cTnI检测线包被液、H-FABP检测线包被液和所述对照线包被液分别在粘有硝酸纤维素膜的聚氯乙烯底板上划线，得到点膜的聚氯乙烯底板；

（5）将样品垫、喷金的金垫、点膜的聚氯乙烯底板和吸水纸组装在一起，切割成人体免疫缺陷病毒抗体检测试纸。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述三羟甲基氨基甲烷、所述蔗糖、所述海藻糖、所述牛血清白蛋白和定容总体积的比例为0.24g：10g：5g：1g：100mL。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述金标稀释液的pH值用1M盐酸调节至8.5，所述包被缓冲液的pH值调节至7.4。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述胶体金是过滤过的，所述搅拌是置于磁力搅拌器上，往搅拌的胶体金中加入0.2M碳酸钾，调节pH并搅拌5min，加入待标记物并搅拌40min，再加入0.1g/mL牛血清白蛋白溶液，搅拌20min，在4℃、转速为10000r/min的条件下离心40分钟，沉淀用所述金标稀释液重悬至离心前体积的1/10，得到标记物。

5.根据权利要求1或4所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述0.2M碳酸钾和所述cTnI标记抗体的比例为4ug/mL:12μg/mL，所述0.2M碳酸钾和所述H-FABP标记抗体的比例为3uL/mL:10μg/mL，所述牛血清白蛋白的加入量占总质量的1%。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述检测线包被液中所述cTnI包被抗体的浓度为1.8mg/mL，所述H-FABP包被抗体的浓度为1.4mg/mL，所述对照线包被液中所述羊抗鼠IgG多抗的浓度为3mg/mL。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（4）中所述金垫采用聚酯纤维膜，在喷金前用金垫处理液浸泡10min后干燥，其中所述金垫处理液是Brij-35（十二烷基聚乙二醇醚）加入水中定容得到，所述Brij-35和定容总体积的比例为1g：100mL。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（5）中所述样品垫采用玻璃纤维膜，在使用前用样品垫处理液浸泡10min后干燥，其中所述样品垫处理液是将比例为0.2g：1.21g：0.2g：0.5mL：25mg的酪蛋白、三羟甲基氨基甲烷、聚乙二醇20000、吐温80和鼠抗人红细胞抗体溶于水中定容。