[发明专利]心肌肌钙蛋白I和心型脂肪酸结合蛋白联检试纸制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物应用技术领域，特别是涉及一种心肌肌钙蛋白I和心型脂肪酸结合蛋白联检试纸的制备方法。

背景技术

急性心肌梗塞（AMI）是中老年人的常见急症，AMI的急救时间是降低死亡率的关键，AMI致死的重要原因是不能早期诊断而延误了治疗时机。因此，研制高灵敏度、高特异性的早期诊断试剂是目前提高AMI诊断率与治疗效果、降低病死率的迫切需要。传统的AMI的诊断依靠胸痛的体征、心电图特征和血清标志物。但是，胸痛并不是典型的症状, 心电图也不是特异性的。因此,心肌标志物的早期检查具有重要的临床应用价值。

近年来有关研究报道cTnI是目前公认的反映心肌坏死的“金标准”,可以检测到微小心肌损害。cTnI仅存于心房肌和心室肌中,且胎儿、新生儿和成年人cTnI均相同,因此,cTnI具100%的心肌特异性,使cTnI成为极好的诊断心肌损伤和区分CK-MB假性升高病人的良好指标。AMI发病后4h血清cTnI可升高, 14～18h达到峰值, 5～10d恢复正常,其灵敏度和特异度均明显高于CK-MB, 其特异性甚至可达100%,敏感性在96.6%以上。其变化有助于观察有无再梗死或梗死再扩展,是心肌梗死经过治疗后判断血管再通与否的最佳指标。

研究表明，在急性心肌梗死患者发病极早期，胞浆中的H-FABP会迅速释放到血浆中，能够直接提示心脏患者的发病情况，故可作为早期诊断心肌梗死程度的有效标志物；且由于其准确性、敏感性和特异性，目前还没有更优越的AMI标志物以取代它的位置。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种心肌肌钙蛋白I和心型脂肪酸结合蛋白联检试纸的制备方法，该制备方法得到的试纸诊断快速且结果准确。

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种心肌肌钙蛋白I和心型脂肪酸结合蛋白联检试纸的制备方法，包括步骤为：（1）将三羟甲基氨基甲烷、蔗糖、海藻糖和牛血清白蛋白溶于水并定容，调节pH值至8-9，得到金标稀释液，用0.01M磷酸二氢钠溶液调节0.01M磷酸氢二钠溶液的pH值至7-8，得到包被缓冲液；

（2）往搅拌的胶体金中加入0.2M碳酸钾，调节pH，加入待标记物并搅拌，再加入0.1g/mL牛血清白蛋白溶液，离心得到沉淀，所述沉淀用所述金标稀释液重悬至离心前体积的1/10，其中所述待标记物为cTnI 标记抗体时得到cTnI免疫金，所述待标记物为H-FABP 标记抗体时得到H-FABP免疫金；

（3）用包被缓冲液稀释cTnI 包被抗体和H-FABP包被抗体分别得到cTnI检测线包被液、H-FABP检测线包被液，用包被缓冲液稀释羊抗鼠IgG多抗得到对照线包被液；

（4）通过点膜喷金设备用cTnI 标记抗体和H-FABP 标记抗体标记的混合液对金垫喷金得到喷金的金垫，其中所述cTnI 标记抗体和H-FABP 标记抗体标记的混合液是由所述cTnI免疫金和所述H-FABP免疫金混合得到的，用所述cTnI检测线包被液、H-FABP检测线包被液和所述对照线包被液分别在粘有硝酸纤维素膜的聚氯乙烯底板上划线，得到点膜的聚氯乙烯底板；

（5）将样品垫、喷金的金垫、点膜的聚氯乙烯底板和吸水纸组装在一起，切割成人体免疫缺陷病毒抗体检测试纸。

在本发明一个较佳实施例中，步骤（1）中所述三羟甲基氨基甲烷、所述蔗糖、所述海藻糖、所述牛血清白蛋白和定容总体积的比例为0.24g：10g：5g：1g：100mL。

在本发明一个较佳实施例中，步骤（1）中所述金标稀释液的pH值用1M盐酸调节至8.5，所述包被缓冲液的pH值调节至7.4。

在本发明一个较佳实施例中，步骤（2）中所述胶体金是过滤过的，所述搅拌是置于磁力搅拌器上，往搅拌的胶体金中加入0.2M碳酸钾，调节pH并搅拌5min，加入待标记物并搅拌40min，再加入0.1g/mL牛血清白蛋白溶液，搅拌20min，在4℃、转速为10000r/min的条件下离心40分钟，沉淀用所述金标稀释液重悬至离心前体积的1/10，得到标记物。

在本发明一个较佳实施例中，步骤（2）中所述0.2M碳酸钾和所述cTnI标记抗体的比例为4uL/mL:12μg/mL，所述0.2M碳酸钾和所述H-FABP标记抗体的比例为3uL/mL:10μg/mL，所述牛血清白蛋白的加入量占总质量的1%。