[发明专利]一种治疗神经损伤的干细胞制剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种干细胞制剂及其制备方法。

背景技术

神经损伤是一种临床多发病，多见于神经内科，若临床治疗方法不当常会引起神经功能受损，引发不可逆的损害。对于神经损伤的临床治疗方法众多，本发明一种通过间充质干细胞治疗患者神经损伤的方法，疗效显著。

干细胞是一类具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的特殊细胞，根据其来源不同可分为胚胎干细胞和成体干细胞两大类。成体干细胞的移植已经在神经系统、造血系统等许多人类疾病的治疗中发挥了重要的作用，成体干细胞具有以下优势：获取相对容易；源于患者自身的成体干细胞在应用时不存在组织相容性的问题，避免了移植排斥反应和使用免疫抑制剂；成体干细胞致瘤风险很低，而且所受伦理学争议较少；成体干细胞还具有多向分化潜能。干细胞移植主要集中在：胚胎干细胞、神经干细胞、骨髓间充质干细胞和脐带血干细胞。干细胞移植修复神经损伤的目的在于：①可以诱导分化为神经元或神经胶质细胞，替代死去的细胞，进而恢复脊髓功能；②可以在体内表达多种神经营养因子，改善细胞外微环境，促进轴突再生，阻止细胞凋亡；③提供新的神经细胞作为再神经化的源头及上下级神经元信号传递的中转站；④填充于损伤区从而抑制胶质细胞的过度增生。干细胞是具有自我更新和多向分化潜能的细胞群体，可发育为某一器官或组织的特性为其在中枢神经系统疾病的保护与修复中的研究及应用奠定了基础。

间充质干细胞是细胞生物学中干细胞家族中的重要组成成员，其来源于发育早期的胚胎的中胚层和外胚层，其最初在人群的骨髓中发现，主要临床特征为具有自我更新、多向分化、造血支持、免疫调控等特点，其临床使用越来越引起人群的重视。在体内或体外一定的诱导条件下可分化为脂肪、肌肉、心肌、肌腱、韧带、肝、骨、软骨、内皮等多种人体组织细胞，采用连续传代培养以及冷冻保存的方法可依然具有多向分化的潜能，临床常作为理想组织器官损伤修复，尤其是神经损伤，临床研究证实，采用间充质干细胞还可以治疗多种血液系统疾病、心血管疾病。神经损伤包括脑外伤、脑血管硬化、脑溢血、脑血栓、后遗症、脑炎与脑膜炎后遗症、脱髓鞘疾病等脑血管病后遗症，采用间充质干细胞治疗神经损伤取得了良好的临床效果，应加强临床推广。

海藻糖是一种由葡萄糖的1,1-糖苷键产生的二糖，由于海藻糖给予甜味并且具有高度保水能力，因而广泛应用于多种食品和化妆品的生产中，此外，由于海藻糖具有稳定细胞膜并且抑制细胞损伤的功能，因而在临床上将其作为器官保护液体的活性组分，用于器官移植。

既往研究显示，在发育脑和成年脑内，神经元和星形胶质细胞均可表达表皮生长因子，且在发育较晚期，表皮生长因子参与神经前体细胞增殖分化及细胞的生存和迁移，同时其作为具有神经营养活性的因子，在神经损伤后可以保护相应的背根神经节感觉神经元，表皮生长因子还是一种脑肠肽神经递质，碱性成纤维生长因子广泛存在于中枢及外周神经系统中，对神经元有维持生存和促进生长及受损神经元的修复与再生作用，且碱性成纤维生长因子能够与其它生长因子协同共同修复神经损伤，表皮生长因子是有丝分裂的促进因子，对细胞分裂具有促进作用，可诱导神经干细胞向星形胶质细胞分化，并促进轴突的生长和维持其存活；碱性成纤维细胞生长因子能维持由表皮生长因子激发的神经干细胞的存活及增殖，同样对神经干细胞具有定向诱导分化作用，并能维持神经元和星形胶质细胞的存活，具有丝裂原样作用，表皮生长因子和碱性成纤维生长因子具有协同作用，促进神经干细胞的分化。

发明内容

本发明提供一种治疗神经损伤的干细胞制剂及其制备方法。

本发明治疗神经损伤的干细胞制剂包括间充质干细胞、海藻糖溶液、表皮生长因子和碱性成纤维生长因子，所述间充干细胞为脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞或脂肪间充质干细胞为P3代～P5代的间充质干细胞。

所述表皮生长因子和碱性成纤维生长因子均购买自Sigma公司。

上述治疗神经损伤的干细胞制剂的制备方法，按以下步骤进行：

一、对间充质干细胞进行分离纯化，传代培养，取P3代～P5代间充质干细胞；

二、对P3代～P5代间充质干细胞进行病毒、无菌、免疫表型、细胞活率、分化功能的检测，各项指标合格后用于干细胞制剂的制备；

三、收集并纯化间充质干细胞，重悬于海藻糖溶液内，海藻糖溶液浓度为50～90mg/mL，海藻糖溶液中含间充质干细胞10⁶～10⁹个/mL，添加表皮生长因子和碱性成纤维生长因子，即可得到干细胞制剂；所述间充质干细胞为脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞或脂肪间充质干细胞。