[发明专利]解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH‑3及其应用

说明书

技术领域

本发明属于水果保鲜、采后病害防治领域，涉及一种解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3及其应用，尤其是在水果如柑橘、香蕉、草莓采后主要病害防治与保鲜中的应用。

背景技术

水果采后病害是影响水果产业健康发展的主要因素，也是水果采后贮运研究的重点。柑桔采后病害主要有青霉病、绿霉病、蒂腐病、酸腐病和炭疽病。香蕉采后病害主要是轴腐病(冠腐病)、炭疽病，草莓采后不耐贮，易腐烂，主要是灰霉病、软腐病。大部分的水果采后病害为侵染性病害，大多从脐部、蒂部和伤口入侵，并可通过病果接触交叉传染，造成采后果实在贮运期内的腐烂变质，失去食用价值，腐烂率一般为10％～30％，会造成严重的经济损失。

为提高水果采后病害防治技术水平、减少化学杀菌剂使用、减少环境污染、降低抗药性，保证食品安全，开发有效、安全、生态的生物防治保鲜产品具有重要意义。

我国水果采后病害的生物防治研究起步较晚、基础较差，现有的研究也大部分还是基础理论研究，从生防菌筛选鉴定、果蔬适应性、生物防治机理、基因诱变改进等方面进行了系列研究与报道，应用性研究较少，较少能实现产业化。另一方面，我国在水果采前的生物防治的基础理论及应用研究较深入，发酵工艺、产品生产等工业化条件较成熟，已有产业化产品，为采后生物防治技术的产业化提供了可能。

解淀粉芽孢杆菌是重要的植物病害拮抗菌，普遍存在于土壤、果蔬与植物的表面及组织内，是动植物的有益菌，生态、环保，对人无毒、安全，较多研究及专利报道了其在农作物病害、土壤微生物及促植物生长、土壤肥力改良，水产养殖等方面的应用，应用范围广、生长适应性强，易在任何介质定殖、繁殖，易大量培养、生产工艺简单，产业化可行性高。

目前解淀粉芽孢杆菌用于采后病害生物防治报道较少，更未有市场化的果蔬采后病害生物防治解淀粉芽胞杆菌类产品，为此开发含解淀粉芽孢杆菌用于水果采后病害防治保鲜的生物产品具重要意义。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种可有效防治水果采后病害的生物防治菌。

本发明的上述发明目的是通过以下技术方案达到的：

一种解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3菌株，该亚种菌株的分类命名为解淀粉芽孢杆菌植物亚种(Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum)，其保藏编号为：CGMCC No.9884，保藏日为2014年10月30日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

本发明的第二个发明目的是提供一种上述解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3原粉的制备方法。

本发明的上述目的是通过以下技术方案达到的：

一种解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3原粉的制备方法，包括如下步骤：

(1)、活化菌种

活化解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3菌株，待解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3在LB固体培养基上的菌落乳白色，圆形，明显突起，表面光滑，不透明，边缘整齐；

(2)、一级种子液的制备

选取LB固体培养基上的单菌落，接种于一级种子摇瓶中，将一级种子摇瓶在32℃、180r/min下培养14小时，得到一级种子液；

(3)、二级种子液的制备

种子罐中的培养基仍为LB液体培养基，121℃下，灭菌20min，将一级种子液接入种子罐中培养，培养结束时得到二级种子液；

(4)、解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3菌液发酵

将步骤(3)所得解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3的二级种子液，按照接种量为1％接入发酵罐中，在发酵培养基下培养，得到发酵成熟菌剂(主要为芽孢)；

(5)、解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3菌原粉

步骤(4)所得的发酵成熟菌剂经碟片离心机或微滤设备浓缩后，加入轻质碳酸钙，浓缩成熟菌剂与轻质碳酸钙的重量比为100:3，得到液固混合物，将该液固混合物搅拌30min后，利用输料泵将液固混合物送入离心式喷雾塔中干燥，得到解淀粉芽孢杆菌植物亚种ZFH-3原粉。

所述步骤(1)中所述LB培养基配方(g/L)：蛋白胨10g，酵母膏5g，NaCl 10g，溶剂为水，pH7.0-7.2，固体培养基在液体培养基中加2％琼脂；