[发明专利]一种基于DNA自组装和G四聚体的分子检测方法及检测试剂盒有效
| 申请号： | 201510102241.1 | 申请日： | 2015-03-09 |
| 公开（公告）号： | CN104726572B | 公开（公告）日： | 2017-05-31 |
| 发明（设计）人： | 陈俊华;周顺桂;温俊林 | 申请（专利权）人： | 广东省生态环境与土壤研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司44205 | 代理人： | 郑莹 |
| 地址： | 510650 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 dna 组装 四聚体 分子 检测 方法 试剂盒 | ||
1.一种基于DNA自组装和G四聚体的双酚A检测试剂盒，包括TMB显色缓冲液、氯高铁血红素、DNA杂交缓冲液，其特征在于：所述试剂盒还包括如下核酸序列：
DNA1：5'-CGACATCTAACCTAGCTCACTGACCCGGTGGGTGGTCAGGTGGGATAGCGTTCCGCGTATGGCCCAGCGCATCACGGGTTCGCACCA-3'；
DNA2：5'-TAAGCTGGAAGCGTCAGTGA-3'；
DNA3：5'-GTCAGTGAGCTAGGTTAGATGTCGCCATGTGTAGACGACATCTAACCTAGCCCTTGTCATAGAGCAC-3'；
DNA4：5'-AGATGTCGTCTACACATGGCGACATCTAACCTAGCCCATGTGTAGA-3'；
DNA5：5'-CCTTGTCATAGAGCACTCCCTC-3'；
DNA6：5'-CTGGGAGGGAGGGAGGGAGTGCTCTATGACAAGGGCTAGGTT-3'。
2.一种双酚A分子的检测方法，包括如下步骤：
1)将过量DNA5和DNA6于DNA杂交缓冲液中混合反应，形成DNA5-DNA6复合物；
2)将DNA1和过量DNA2于DNA杂交缓冲液中混合反应，形成DNA1-DNA2复合体；
3)将DNA1-DNA2复合体内加入待测样品、DNA3和DNA4，混合反应完全，得到DNA3-DNA4复合物；
4)将DNA3-DNA4复合物、DNA5-DNA6复合物、氯高铁血红素、TMB显色缓冲液混合，如反应体系产生蓝色底物，说明待测样品含有双酚A分子；
其中，DNA1～DNA 6的序列组成如权利要求1所示。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于：DNA杂交缓冲液为Tris-HCl缓冲液，含有200 mM NaCl以及50 mM KCl。
4.根据权利要求2或3所述的检测方法，其特征在于：TMB显色缓冲液，含有26.6 mM柠檬酸，51.4 mM磷酸氢二钠，25 mM KCl，10 uL 0.5%的TMB，20 uL 30%的H2O2，pH=5.0。
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