[发明专利]一株高产精氨酸脱亚胺酶的蜡样芽孢杆菌及其应用

权利要求书

1.一株高产精氨酸脱亚胺酶的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)93-11，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2015047。

2.权利要求1所述的蜡样芽孢杆菌在生产L-瓜氨酸中的应用。

3.一种生产L-瓜氨酸的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)将保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2015047的蜡样芽孢杆菌93-11经种子培养和发酵培养后，得到含精氨酸脱亚胺酶的蜡样芽孢杆菌静息细胞；

2)将步骤1)得到的蜡样芽孢杆菌静息细胞加入到精氨酸水溶液中，调节混合溶液pH为6-7，在37-50℃条件下反应，然后升温至60-100℃使蛋白凝结；

3)从混合溶液中分离纯化L-瓜氨酸。

4.如权利要求3所述的生产L-瓜氨酸的方法，其特征在于：反应前的混合溶液中蜡样芽孢杆菌静息细胞的重量含量为0.5-1％，精氨酸的重量含量为10-30％。

5.如权利要求3所述的生产L-瓜氨酸的方法，其特征在于：所述种子培养包括一级种子培养和二级种子培养，

所述一级种子培养的培养基是：0.1-10％蛋白胨，0.1-5％酵母粉，0.1-10％氯化钠，0.1-10％甘油，余量为去离子水，pH为6-7；

所述二级种子培养的培养基是：0.1-5％甘油，0.1-5％玉米浆，0.1-5％精氨酸，余量为去离子水，pH为6-7。

6.如权利要求3所述的生产L-瓜氨酸的方法，其特征在于：所述发酵培养的培养基是：0.1-5％甘油、0.1-5％玉米浆、0.1-5％精氨酸，0.1-5％无机盐，余量为去离子水，pH为6-7。

7.如权利要求3所述的生产L-瓜氨酸的方法，其特征在于：所述分离纯化L-瓜氨酸的方法是，包括以下步骤：

1)调节混合溶液pH至3-7，加入活性炭脱色，过滤；将滤液浓缩至波美度为20-30，冷却结晶，离心收集结晶，烘干后得一次L-瓜氨酸粗品，离心液用于继续分离L-瓜氨酸；

2)调节离心液pH至1-5，上离子交换树脂柱交换，用2-5M氨水洗脱，收集洗脱液；

3)将洗脱液浓缩至波美度为20-30，冷却结晶，离心收集结晶，烘干后得二次L-瓜氨酸粗品，离心液按上述方法再次调节pH至1-5，上离子交换树脂柱交换，用2-5M氨水洗脱，收集洗脱液，浓缩，冷却结晶，离心收集结晶，烘干得到三次L-瓜氨酸粗品；

4)将一、二、三次L-瓜氨酸粗品混合后加10-100倍重量的纯水溶解，再次加入活性炭脱色，将滤液浓缩至波美度为20-30，冷却结晶，离心收集结晶，烘干得到L-瓜氨酸精制纯品。

8.如权利要求7所述的生产L-瓜氨酸的方法，其特征在于：所述离子交换树脂柱是D001阳离子交换树脂柱。

9.如权利要求3所述的生产L-瓜氨酸的方法，其特征在于：步骤2)中所述反应的时间是10-50h。