[发明专利]生物改性半夏蛋白的制备方法及其在制备抗肺癌药品中的应用

权利要求书

1.一种生物改性半夏蛋白的制备方法，其特征在于所述制备方法步骤如下：

（1）将1000g生物改性半夏虫体在常温膨化装置中常温条件下膨化粉碎；

（2）膨化粉碎后的物料加入到膨胀溶剂体系提取装置中，加入由1~10Kg液态二氧化碳、100~500mL甲醇及100~300gNH₃·H₂O组成或由1~10Kg液态二氧化碳、100~500mL乙醇及100~300g氯化铵组成的膨胀溶剂并加压至2~10MPa，形成膨胀溶剂体系，提取出生物改性半夏蛋白粗品；

（3）收集含有生物改性半夏蛋白粗品的溶液并且用微孔过滤器过滤去掉杂质；

（4）用超滤机超滤处理，收集生物改性半夏蛋白超滤溶液；

（5）超滤液溶解在乙腈中用固相萃取柱分离，收集洗脱成分；

（6）将洗脱成分溶解在由正丁醇-乙酸乙酯-水按体积比1.25:3.75:5组成或由聚乙二醇-葡聚糖T500按重量比4.5:7组成的溶剂体系中，用超声驻波液相制备色谱分离纯化；

（7）纯化后的生物改性半夏蛋白用真空冷冻干燥机制备成冻干蛋白粉。

2.根据权利要求1所述的生物改性半夏蛋白的制备方法，其特征在于所述膨化压力为0.1~5MPa，时间为10~60min。

3.根据权利要求1所述的生物改性半夏蛋白的制备方法，其特征在于所述提取温度为10~20℃，时间为10~30min。

4.根据权利要求1所述的生物改性半夏蛋白的制备方法，其特征在于所述微孔过滤器的孔径为0.5~50μm，超滤机的孔径为50~100nm。

5.根据权利要求1所述的生物改性半夏蛋白的制备方法，其特征在于所述真空冷冻干燥温度为-30~50℃、时间为18~26h。

6.权利要求1-5任一所述方法制备的生物改性半夏蛋白在制备抗肺癌药品中的应用。

7.根据权利要求6所述的生物改性半夏蛋白在制备抗肺癌药品中的应用，其特征在于所述抗肺癌药品的剂型为栓剂，制备方法如下：

取生物改性半夏蛋白冻干蛋白粉100~150g、卵磷脂1~15g、液体石蜡200~350g，将三者搅拌均匀，用研磨机以30~60r/min研匀成糊状，另取乌桕脂100~200g在水浴上加热40~60℃熔化后，冷却至25~38℃，倒入研匀的生物改性半夏蛋白-卵磷脂-液体石蜡混合物中迅速搅拌均匀，趁热浇注于栓剂模具中，冷凝到10~20℃，从栓剂模具中取出即为成型的生物改性半夏蛋白栓剂。

8.根据权利要求6所述的生物改性半夏蛋白在制备抗肺癌药品中的应用，其特征在于所述抗肺癌药品的剂型为脂质体注射剂，制备方法如下：

（1）1mol磷脂酰丝氨酸用玻璃平面成型法制成薄膜后，加入1000~3000L生理盐水水合处理，再用超声波在频率500~2000KHz、功率0.01~5KW处理1~5min；

（2）取上述溶液1~100mL加入到含量0.001~0.01mol/L的0.1~1000mLCaCl₂溶液中，在转速30~75r/min条件下搅拌10~30min，然后在25~50℃条件下静置30~120min；

（3）将生成物放置离心机中，在转速1500~3000r/min离心分离5~30min，将离心物从离心机中取出后加入2~50g生物改性半夏蛋白混合均匀，在10~25℃条件下静置10~120min；

（4）上述物体加入含有0.01~10mol/L的乙二胺四乙酸的生理盐水溶液0.1~10L中，混合均匀静置30~180min，得到单层脂质体；

（5）取1~10mg单层脂质体与10~200mL生理盐水溶液混合，制备成为注射剂。

9.根据权利要求6所述的生物改性半夏蛋白在制备抗肺癌药品中的应用，其特征在于所述抗肺癌药品的剂型为肠溶胶囊，制备方法如下：

取10~100g生物改性半夏蛋白、500~2000g预凝胶淀粉及5-50g乳糖充分混合，填充入羟丙基甲基纤维素肠溶胶囊中，制备成为生物改性半夏蛋白肠溶胶囊。

10.根据权利要求6所述的生物改性半夏蛋白在制备抗肺癌药品中的应用，其特征在于所述抗肺癌药品的剂型为气雾剂，制备方法如下：

将10~20g生物改性半夏蛋白粉碎至2~5μm，用50~70%乙醇溶解均匀定溶于300mL，再加入聚乙二醇（200）单月桂酸酯0.2~0.5g溶解均匀，在不断搅拌条件下定量分装于100瓶气雾剂耐压瓶内，压盖后在800~1000KPa压力下向瓶内压入3~5g二氯二氟甲烷，即成为生物改性半夏蛋白气雾剂。