[发明专利]一种嗜水气单胞菌和产酸克雷伯氏菌的联合检测方法

权利要求书

1.一种嗜水气单胞菌和产酸克雷伯氏菌的联合检测方法，其特征在于包括以下步骤：

1)用碳酸盐包被液分别稀释抗嗜水气单胞菌抗体IgG1和抗产酸克雷伯氏菌抗体IgG2，加入96孔微孔板，洗涤；

2)每孔加入200μL的1％BSA，37℃封闭2h，洗涤；

3)每孔加入用分析缓冲液稀释的嗜水气单胞菌和产酸克雷伯氏菌混合菌悬液，阴性对照孔以分析缓冲液代替，37℃振荡孵育1h，洗涤；

4)将工作浓度的Sm³⁺-IgG1和Eu³⁺-IgG2等体积混合，每孔加入100μL，25℃振荡孵育90min，洗涤；

5)每孔加入200μL增强液，室温振荡15min；

6)多标记分析仪上测量时间分辨荧光TRF，测量参数设置为延迟时间0.4ms，测量时间0.4ms，嗜水气单胞菌检测固定激发波长340nm，发射波长642nm，产酸克雷伯氏菌检测固定激发波长340nm，发射波长615nm；

7)以样品孔的TRF值P与对照孔的TRF值N之比大于2时判断为阳性。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(1)具体为碳酸盐包被液稀释两种抗体，等浓度等体积混合，每孔100μL，4℃包被12h。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于：所述的碳酸盐包被液通过以下组分制备：Na₂CO₃1.49g，NaHCO₃2.93g，NaN₃0.2g，去离子H₂O定容至1L。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的Sm³⁺-IgG1的稀释度为1:600，Eu³⁺-IgG2的稀释度为1:1280。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的分析缓冲液通过以下组分制备：Tris-base 6.057g，Tween-201mL，BSA2g，DTPA 0.0196g，NaCl 9g，NaN₃0.5g，去离子H₂O定容至800mL，浓盐酸调pH值到7.8，去离子H₂O定容至1L。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的洗涤采用的洗涤缓冲液通过以下组分制备：Tris-base 6.057g，Tween-202mL，NaCl 9g，NaN₃0.5g，去离子H₂O定容至800mL，浓盐酸调pH值到7.8，去离子H₂O定容至1L。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的增强液通过以下组分制备：Triton X-1001mL，β-NTA 3.99mg，TOPO19.33mg，邻苯二甲酸氢钾1.3g，冰醋酸6mL，去离子H₂O定容至1L。