[发明专利]一种肺癌miRNA检测试剂盒及其miRNA的应用

权利要求书

1.miR-21、miR-24、miR-125b和miR-126联合使用作为肺癌分子标记物的应用。

2.miR-21、miR-24、miR-125b、miR-126和miR-39联合使用在制备肺癌miRNA检测试剂盒中的应用，其中miR-39作为内参。

3.如权利要求2所述的肺癌miRNA检测试剂盒，其检测体系包括反转录反应体系、RCR反应体系和内参体系，其特征在于：所述RCR反应体系中包括分别针对miR-21、miR-24 、miR-125b和miR-126的正向引物和反向通用引物；所述内参体系中包括内参miRNA-39和针对miR-39的正向引物；针对所述miR-21的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；针对所述miR-24的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；针对所述miR-125b的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；针对所述miR-126的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；针对所述miR-39的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；所述反向通用引物的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。

4.根据权利要求3所述的肺癌miRNA检测试剂盒，其特征在于：用于配制所述RCR反应体系的试剂包括SYBR Green混合液、正向引物液、反向通用引物液和纯水；用于配制所述反转录反应体系的试剂包括多聚腺苷酸聚合酶、反转录酶混合液、反转录缓冲液和无核酸酶纯水。

5.根据权利要求4所述的肺癌miRNA检测试剂盒，其特征在于：所述RCR反应体系的总体积为10μl；其中，所述SYBR Green混合液的体积是5μl，所述正向引物液的体积是1μl，所述反向通用引物液的体积是1μl，所述DNA模板1μl,其余是纯水；所述正向引物液的使用浓度为2μM，所述反向通用引物液的使用浓度为2μM；所述DNA模板是所述反转录反应体系反应后的产物稀释五倍获得的。

6.根据权利要求4所述的肺癌miRNA检测试剂盒，其特征在于：所述反转录反应体系的总体积为12.5μl；其中，所述多聚腺苷酸聚合酶的体积是0.5μl，所述反转录酶混合液的体积是0.5μl，所述反转录缓冲液的体积是2.5μl，所述miRNA样品的加入量是20ng，其余是无核酸酶纯水；所述多聚腺苷酸聚合酶的使用浓度为2.5U/μl；所述miRNA样品中含有内参miRNA-39。

7.根据权利要求4所述的肺癌miRNA检测试剂盒，其特征在于：所述内参miRNA-39是在抽提miRNA样品过程中加入的体积为2 μl的内参miRNA-39液，所述内参miRNA-39的使用浓度为0.2μM。