[发明专利]一种先天性耳聋基因多通道荧光PCR检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种先天性耳聋基因多通道荧光PCR检测试剂盒，属于基因检测技术领域。

背景技术

耳聋是临床常见的遗传性疾病之一，严重影响人类的生活质量。2006年中国第二次残疾人抽样调查显示：全国残疾总数高达8000多万，现有听力语言残疾者达2780万人，占残疾总数的35％左右，其中单纯听力残疾2004万。听力言语残疾者中7岁以下的聋儿达80万人并以每年新增5万聋儿的速度在增长。由此可见，我国听力损失人群的现状尤为严重。

根据听觉系统所受影响的性质、原因和病变部位可将耳聋分为三类：传导性耳聋(外耳病变)、感音神经性耳聋(内耳病变)、混合性耳聋。而感音神经性耳聋又分为遗传性耳聋(遗传性耳聋包括先天性耳聋、药物性耳聋、迟发性耳聋)、非遗传性耳聋。其中先天性耳聋占遗传性耳聋的60％，主要表现为出生后就对声音没有反应，如果不配戴助听器和接受语言训练，不但无法进行正常的交流，而且还阻碍了聋儿正常的智力发育，成为家庭和社会沉重的负担。多方研究资料证实引起先天性耳聋的基因位点有100多个，主要是GJB2和GJB3基因突变，GJB2基因常见的突变为：235delC、299-300delAT、176del16bp、35delG、512insAACG、155delTCTG；GJB3基因常见的突变为538C>T、547G＞A，以上位点的突变比例占先天性耳聋突变位点的90％以上。

GJB2基因和GJB3基因主要编码间隙连接蛋白26和31，间隙连接蛋白(connexin)，是整合膜蛋白，6分子蛋白形成一个连接子，中间有2-3mm亲水性孔道，允许钾离子、钙离子和小的信号分子通过。在声音传导的过程中，进入毛细胞的钾离子会通过间隙链接重新回到耳蜗血管纹；如果间隙连接蛋白突变，离子交换受到影响，毛细胞的离子梯度失衡，从而引起听力损失。这两种基因突变导致的耳聋为语前、双侧、对称性耳聋，听力损失程度变异较大，可由轻度到极重度，但多数为重度或极重度耳聋，干预措施有配戴助听器和电子耳蜗移植，进行早期听力恢复。

由上述可知，GJB2/GJB3突变患者，主要病变在耳蜗，而听神经是正常的，所以对于此类患者，植入人工耳蜗是目前临床上最为理想的治疗方式。通过对GJB2、GJB3基因常见突变位点检测，一方面可尽早发现尽早治疗，利用聋儿的残余听力，植入人工耳蜗，在人类语言发育的关键时期，进行特殊的语言训练，避免聋哑残疾，对先天性耳聋患者的康复有重大意义，另一方面可以对已生育耳聋患儿的夫妇再次生育时进行产前基因诊断，对育龄夫妇进行携带者的筛查，发现高危人群，从而进行相应的遗传咨询和指导，从根本上降低出生缺陷，提高人口素质。

随着基因检测技术的发展以及对听力健康的关注，目前市场上检测耳聋的试剂盒所用的方法主要有基因芯片法、溶解曲线法、ARMS-PCR法、RFLP法。其中，基因芯片法一般需要提取、PCR扩增、杂交、洗涤、扫描等步骤，操作较复杂耗时长，对操作者和实验场地要求较高。溶解曲线法对仪器的温控性要求很高，要求仪器具有高分辨率溶解曲线分析(HRM)功能，而我们常用的ABI系列荧光定量PCR仪一般缺少此功能。ARMS-PCR法和RFLP法需要对PCR产物进行电泳分析，不适于临床应用。

发明内容

针对上述现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种先天性耳聋基因多通道荧光PCR检测试剂盒，该试剂盒能专一地检测先天性耳聋中常见的八个位点，一个PCR反应管内可对这八个位点同时进行检测，明确高突变率位点的类别，确定低突变率位点范围，且操作简便快捷，结果客观可控性强，效率高、成本低，闭管操作防污染，适用多通道荧光PCR仪，是临床上进行先天性耳聋检测的强有力产品。

为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：