[发明专利]用于检测苹果牛眼果腐病致病菌的LAMP引物组及其应用在审
| 申请号： | 201510088767.9 | 申请日： | 2015-02-26 |
| 公开（公告）号： | CN104630376A | 公开（公告）日： | 2015-05-20 |
| 发明（设计）人： | 李鑫;李立梅;张晓军;曹冬梅 | 申请（专利权）人： | 李鑫;李立梅;张晓军;曹冬梅 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 大连格智知识产权代理有限公司 21238 | 代理人： | 刘晓琴 |
| 地址： | 116001 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 检测 苹果 牛眼果腐病 致病菌 lamp 引物 及其 应用 | ||
1.用于检测苹果牛眼果腐病致病菌的LAMP引物组，其特征在于，包括由SEQ IDNo.1～4编码的四条引物：
F3：5’-ACGGATCTCTTGGTTCTGG-3’[SEQ ID No.1]
B3：5’-TTACTACGCTTAGAGCCAGA-3’[SEQ ID No.2]
FIP：5’-GCGCAATGTGCGTTCAAAGATT-GAACGCAGCGAAATGCGATA-3’[SEQ ID No.3]
BIP：5’-TGTTCGAGCGTCATTACAACCC-CGCCACTGATTTTAGGGC-3’[SEQID No.4]。
2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于所述的苹果牛眼果腐病致病菌为明孢盘菌属致病菌，包括：Neofabreae perennans，Neofabreae malicorticis和Neofabreae alba。
3.用于检测苹果牛眼果腐病致病菌的LAMP试剂盒，包括权利要求1所述的引物组。
4.基于LAMP的苹果牛眼果腐病致病菌检测方法，包括如下步骤：
a.提取待测样品DNA；
b.以权利要求1所述的引物组为引物，以步骤a所提取的DNA为模板进行LAMP扩增；
c.扩增产物分析及结果判断。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的步骤b中LAMP扩增条件为：65℃恒温30～60min；80℃恒温5min或在95℃下恒温2min；终止反应。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的步骤b中LAMP扩增反应体系各引物浓度为：F3，0.2u mol/L；B3，0.2u mol/L；FIP，1.6u mol/L；BIP，1.6umol/L。
7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的步骤b中LAMP扩增反应体系的待测样品DNA浓度为1.6ng/μL。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的步骤a所制备的DNA样品的OD260/OD280为1.7～2.0。
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