[发明专利]一种提高生物絮凝剂活性成分多糖产量的发酵方法

权利要求书

1.一种提高生物絮凝剂活性成分多糖产量的发酵方法，其特征在于它是按照以下步骤操作的：首先将生物絮凝剂产生菌接种至絮凝发酵液体培养基中，发酵制备种子液；然后将种子液接种于投加了外源AHLs的絮凝发酵液体培养基中，进行二次发酵，即制得生物絮凝剂，完成所述的提高生物絮凝剂活性成分多糖产量的发酵；其中，外源AHLs为N-3-氧-辛酰高丝氨酸内酯、N-己酰高丝氨酸内酯中的一种或两种按任意比混合；其中，投加了外源AHLs的絮凝发酵液体培养基为将外源AHLs加入到絮凝发酵液体培养基中至外源AHLs的终浓度为0.1μM～0.5μM；生物絮凝剂产生菌为革兰氏阴性细菌，即根瘤土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciems)F2，保存于中国微生物菌种保藏中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2014年12月03日，保藏编号为CGMCC No.10131；

外源AHLs为将N-3-氧-辛酰高丝氨酸内酯和N-己酰高丝氨酸内酯分别溶于溶剂二甲基亚砜形成的溶液或二者混合后的溶液。

2.根据权利要求1所述的一种提高生物絮凝剂活性成分多糖产量的发酵方法，其特征在于外源AHLs的N-3-氧-辛酰高丝氨酸内酯溶液和N-己酰高丝氨酸内酯溶液的浓度均为0.1μM～0.5μM。

3.根据权利要求1所述的一种提高生物絮凝剂活性成分多糖产量的发酵方法，其特征在于絮凝发酵液体培养基配制如下：1L蒸馏水中加入10g的葡萄糖、5g的K₂HPO₄、2g的KH₂PO₄、0.1g的MgSO₄·7H₂O、0.1g的NaCl、0.5g的尿素和0.5g的酵母膏；pH为7.2～7.5，112℃灭菌30min，即完成絮凝发酵液体培养基的配制。

4.根据权利要求1所述的一种提高生物絮凝剂活性成分多糖产量的发酵方法，其特征在于生物絮凝剂产生菌接种前需进行活化培养。

5.根据权利要求4所述的一种提高生物絮凝剂活性成分多糖产量的发酵方法，其特征在于活化培养操作如下：将生物絮凝剂产生菌转接到普通固体培养基的平皿中活化，于30℃培养1～2天；反复活化2～3代后，即完成活化培养。

6.根据权利要求1所述的一种提高生物絮凝剂活性成分多糖产量的发酵方法，其特征在于发酵制备种子液的条件为：发酵温度为30～32℃，转速为140～150r/min，发酵时间为24～26h。

7.根据权利要求1所述的一种提高生物絮凝剂活性成分多糖产量的发酵方法，其特征在于二次发酵的条件为：发酵温度为30～32℃，转速为140～150r/min，发酵时间为24～26h。